Researchers used an antibody that targets neurons to visualize the entire mouse peripheral nervous system.
В течение многих лет исследователи стремились заглянуть под кожу на уровне организма, но ограничения в доступных технологиях мешали их прогрессу. Теперь исследователи под руководством Ali Erturk, нейробиолога из Мюнхенского университета имени Гельмгольца, разработали новый химический метод, получивший название wildDISCO, который позволяет проводить иммуноокрашивание всего тела с помощью готовых антител.1
Секрет успеха wildDISCO заключается в соединении, удаляющем холестерин, которое извлекает липид из клеточных мембран, не нарушая структуру клетки. "Это своего рода волшебное химическое вещество", - говорит Jie Luo, постдокторант в лаборатории Эртюрка, который помог разработать метод и стал соавтором статьи. По словам Luo, это соединение помогает стандартным антителам легче и однороднее проникать в клетки.
Сначала команда применила этот метод для составления карты периферической нервной системы мыши. Зафиксировав тело мыши, Луо и его коллеги прокачали через ее кровеносную систему растворы, содержащие молекулs, удаляющие холестерин, а затем добавили паннейрональный маркер (PGP9.5), соединенный с флуоресцентной меткой. Затем команда сделала прозрачным все тело мыши с помощью метода, который ранее разработал Эртюрк.2 Используя микроскопию светового листа, они получили изображение всего тела мыши, а затем сшили изображения вместе с помощью программного обеспечения, чтобы создать 3D-представление периферической нейронной сети мыши.
Полученное изображение показывает различные уровни периферической нервной системы, которые команда обозначила цветом: нервы, расположенные глубже в теле животного, отображаются желтым и розовым цветом, а нервы, расположенные ближе к камере, - синим тоном. Такое картирование всего тела позволило команде четко увидеть, как иннервируются различные органы, выявить связи, которые могут помочь другим исследователям лучше понять роль этих проекций в состоянии здоровья и болезни.
По словам Луо, успешная маркировка побудила команду продолжить проверку других антител с помощью этой техники и подчеркнула потенциал wildDISCO для улучшения понимания исследователями сложных биологических систем.
Mai H, et al. Nat Biotechnol. 2023;10.1038/s41587-023-01846-0.
Erturk A, et al. Nat Protoc. 2012;7(11):1983-1995.
References
Mai H, et al. Nat Biotechnol. 2023;10.1038/s41587-023-01846-0.
Ertьrk A, et al. Nat Protoc. 2012;7(11):1983-1995.
