Перенос RA является одной из главных нейрологических функций ретиноидов, регулирует пролиферацию, миграцию клеток и вызывает клеточную гибель при высоких концентрациях. RA соединяется с ретиноидными рецепторами, которые активируют транскрипцию генов мишеней в головном мозге взрослых (Goodman and Pardee, 2003; Lane and Bailey, 2005). Ядерные рецепторы ретиноевой кислоты (RARs) и retinoid X receptors (RXRs) состоят каждый из трех субтипов (A, B и G). Семейство RAR (RARA, B и G) активируется с помощью all-trans RA и с помощью 9-cis RA, тогда как RXR семейство (RXRA, B и G) активируются с помощью 9-cis RA и др. малых молекул, включая docosahexaenoic кислоту и arachidonic кислоту. RXRs участвуют во всех каскадах передачи сигналов ретиноидов и все экспресси he.ncz у взрослых. RA контролирует транскрипцию путем соединения с димерами RAR/RXR, которые локально модифицируют структуру хроматина. Синтез и деградация RAR и RXR с помощью протеасом и фосфорилирования контролируют количественный и временной аспекты retinoid реакций. RA вместе со своими рецепторами регулирует экспрессию многочисленных генов мишеней, участвующих в раннем начале болезни Алцгеймера, включая, но не ограничиваясь MAPT, APP, PS1, BACE, ADAM10 (rev. Goodman and Pardee, 2003) и APOE (Liang et al., 2004). Как гены, так и среда могут приводить к снижению способности ретиноидов или за счет мутаций генов, который участвуют в использовании ретиноидов, их транспорте, метаболизме и/или связывании RA со своими рецепторами или за счет эпигенетический изменений, которые модифицируют активируемые RA транскрипции генов.
В головном мозге взрослых двумя главными областями передачи сигналов RA являются обонятельные луковицы и гиппокамп, два региона преимущественно затрагиваемые при LOAD. В отсутствие лиганды рецепторы RA могут становиться активными репрессорами, а репрессия транскрипции может быть важной функцией для RA рецепторов в этих регионах взрослого головного мозга. Средовые факторы, затрагивающие передачу сигналов ретиноидов, включая диету. лекарства и химические соединения, которые влияют на энзимы продукции и удаления RA. Все эти факторы участвуют в ходе естественного старения, в результате чего происходит снижение уровней ретиноидов с возрастом. В мышиных моделях раннее истощение ретиноидов вызывает отложение amyloid β (Aβ) во взрослом головном мозге (Corcoran et al., 2004), в то время как усиление экспрессии ретиноидных рецепторов нормализует стрых мышей с нарушенной памятью (Etchamendy et al., 2001; Misner et al., 2001). Истощение ретиноидов снижает экспрессию белков, участвующих в amyloidogenic пути и последующее применение RA восстанавливет экспрессию RARB, APP695, BACE и APP С-терминального фрагмента (Husson et al., 2006). Эти результаты указывают на активную роль ретиноидов в процессах запоминания у взрослых и LOAD.
Исследования показали, что ретиноиды необходимы для пластичности нейронов в терминах долгодействующей потенциации и депрессии (Misner et al., 2001; Crandall et al., 2004) и что ретиноиды способствуют как выросту дендритов (Clagett-Dame et al., 2006), так и влияют на взрослый нейрогенез (Crandall et al., 2004). Ослабление синаптической пластичности может быть основой снижения познавательной способности, отмечаемого при LOAD, те нейроны. которые дегенерируют при LOAD, обладают высокой степенью пластичности, скоррелированной с развитием нейрофибриллярных клубочков (rev. Goodman et al., in press).
Мы полагаем, что транскрипция генов, которые как известно, мутантны при LOAD, модулируется при LOAD с помощью аллельных вариантов ретиноидных рецепторов и\или генов ретиноидного каскада, которые изменяют доступность ретиноидов для тканей мишеней (Goodman and Pardee, 2003). Ретиноидами регулируемые мишени, имеющие отношение к болезни Алцгеймера, включают MAPT, APP, PS2 и BACE среди др. IDE деградирует амилоидные бляшки. IDE содержит RARA response элемент в своем промоторе, а транскрипция IDE регулируется с помощью RA. Описано специфическое снижение (20%-30%) в уровнях мРНК ретиноидных рецепторов RARB и RXRG в гипоталямусе старых мышей (Etchamendy et al., 2001).
CHROMERON CHROMOSOMAL ORGANIZATION SUPPORTS A ROLE FOR RETINOIDS IN LOAD
Среди нескольких хромосомных локусов, идентифицированных с помощью сканирования генома, хромосомные области 10q23 и 12ql3 наиболее часто ассоциируют с LOAD (Nowotny et al., 2005; Liang et al., 2006; Lin et al., 2006). Однако, пока не идентифицированы окончательно гены. Важные гены, связанные с ретиноидами обнаружены в каждом из этих локусов (Table 1). Также в локусах находятся гены, которые являются предметом активных исследований при LOAD. Ко-локализация retinoid генов с генами LOAD, которые являются мишенями retinoid активации трансляции указывают на то, что образование кластеров из этих генов является скорее функциональным, чем обусловлено стохастическими процессами. Мы обозначает эти кластеры генов на хромосомах человека, "Chromeron". Chromerons предположительно состоят из многочисленных соседних ко-регулируемых генов и отличаются от amplicons, которые являются длинными повторами одиночного гена. Сходное расположение отмечается у прокариот, у которых оперонный механизм контролирует транскрипцию нескольких функционально связанных генов. Возможно подобный механизм мог бы снова в виде мотива ДНК, присутствующего в регионах, окружающих retinoid гены, которые контролируют расстояние, вдоль которого формируются паттерны of DNA histone ацетилирования и метилирования (Sinha et al., 2006), коордирнируя тем самым экспрессию генов, соседствующих с retinoid генами. Степень такой координации предстоит исследовать.
Достоверные генетические сцепления с LOAD продемонстрированы для маркеров, тесно расположенных к 4 из 6 RA рецепторов:
TABLE 1. Chromosomal positions of retinoid cascade genes clustered in chromerons with LOAD linkages or associations
Chromosomal positions as band, kilobase (kb), for selected genes of the retinoid cascade and genes or markers linked to LOAD at those loci. Markers and genes were located using the Human Genome Browser Gateway (http//genome.ucscedu/cgi-bin/hgGateway) as of March 2006. An earlier but more complete version of this table may be found in Goodman and Pardee (2003).
RA receptor gamma (RARG) в 12ql3.13, retinoid X receptor B (RXRB) в 6p21.3, RXRG в lq21 и RARA в 17q21. RBP4 и два из трех CYP26s, CYP26A1 и Cyp26Cl картируются на 10q23. CYP26B1 картируется на 2pl3, очень близко к локусу SNP маркера D2S286, идентифицирующего ген болезни Паркинсона, PARK3. Обзор всех локусов, ассоциированных с LOAD см. Goodman and Pardee (2003) и Goodman et al. (in press).
Хромосома 12ql3.13 предоставляет строгие доказательства сцепления с LOAD (Liang et al., 2006; Lin et al., 2006). В этой области липопротеин низкой плотности, receptor-related protein 1 (LRPl) считается геном кандидатом, но его роль не устанровлена окончательно, предполагается. что др. ген вблизи, пока не идентифицированный и неизвестный, является причинным (D'Introno et al., 2005). RARG d 12ql3.13 позиции 51,891-51,912 Kb расположен внутри 1 Mb LOAD-сцепленных маркеров D12S368 (Liang et al., 2006), D12S96 (Rogaeva et al., 1998) и ATF7 (Lin et al., 2006). LRPl находится в позиции 55,808-55,933 близко к кластеру из 5 из 7 retinol dehydrogenases, которые обратимо превращают retinol в retinal. Хотя, кстати, не было исследовании ретиноидной регуляции LRPl, низкой плотности липопротеиновые рецепторы часто регулируются с помощью retinoid рецепторных гетеродимеров (Norata et al., 2005).
Хромосома 10q23 обладает маркером D10S583 внутри IDE гена (Bertram et al., 2000). Этот маркер строго сцеплен с LOAD, а IDE является потенциальным кандидатом, т.к. он деградирует Aβ (Nowotny et al., 2005). Хотя чрезвычайное неравновесное сцепление выявляется в локусе IDE (Abraham et al., 2001), отсутствуют доказательства сцепления самого IDE с LOAD, и отсутствуют полиморфизмы в ID, достоверно ассоциирующиеся с LOAD (Nowotny et al., 2005; Feuk et al., 2005), это указывает, что транскрипционная регуляция скорее, чем трансляция белка IDE может увеличивать восприимчивость к LOAD. CYP26A1 находится на 417 Kb от IDE. CYP26A1 обусловливает гидроксилирование и деградацию all-trans RA (Niederreither et al., 2002) и тем самым контролирует доступность RA. Др. ген CYP26C1 локализуется непосредственно дистальнее CYP26A1. Также включен в область сцепления клеточный retinol-binding protein 4 (RBP4), первичный транспортер retinol в сыворотке (Goodman, 1987). RBP4 увеличивается при type 2 diabetes и ожирении (Yang et al., 2005), двух состояниях, ассоциированных с повышенным риском LOAD.
Хромосома 2pl3 сцеплена с AD с психозом (Bacanu et al., 2002). Третий, экспрессирующийся в головном мозге RA-инактивирующий энзим, CYP26B1, находится на хромосоме 2pl3. Важно, что эта находка устанавливает сцепление LOAD с обеими хромосомными локализациями CYP26.
Хромосома l7q21 является локусом RARA непосредственно стоящим выше анонимного маркера D17S1787, который недавно оказался сцепленным с MAPT-негативной деменцией лобных долей в одной семье с множественным логарифмом odds score of 5.51. Эта оценка находится среди наивысших, полученных для какого-либо сцепления с деменцией. LOAD не был исключен в 4 из 12 случаев в этой семье. Активный анализ мутаций в 17q21 из MAPT и Saitohin, др. гене кандидате AD, исключил эти два гена, что привело авт. к предположению, что ответственен неизвестный ген в этой области (Rademakers et al., 2002). Хромосомы lq23, локус RXRG и 6p21.3 локус RXRB ассоциированы с LOAD , по крайней мере, в трех исследованиях сцеплений. Хромосома 3q23 строго сцеплена с LOAD в одном исследовании (Poduslo et al., 1999). Retinol-binding protein (RBP) 1 и RBP2 картированы в этом регионе.
Приведенные выше находки по ко-локализации локусов LOAD и связанных с ретиноидом генов подтверждают, что retinoids играют роль в этом заболевании. Как могут мутации в этих связанных с ретиноидами генах участвовать в AD, на что указывает их ко-локализация с локусами LOAD? Мы полагаем, что редкие мутации retinoid рецепторов RARG в 12ql3, RXRG в 1q23,RARA в 17q21 и RXRB в 6p21.3 могут скоррдинировано дерегулировать гены кандидаты LOAD Chromeron способом, в соответствии с эксплуатационной способностью RA. Напр., RARG/RXRG гетеродимер, активированный с помощью RA, позитивно регулирует экспрессию RA-деградирующего энзима CYP26A1, (Loudig et al., 2005). RA тем самым влияет на свое собственное удаление.
Как показывает Table 1 существуют соотв. взаимоотношения между областями генома повторно сцепленными с LOAD и локусами генов метаболического каскада ретиноида и ретиноидными ядерными рецепторами. Однако, ни один из локусов, сцепленных с семейной с ранним началом болезнью Алцгеймера не находится вблизи локусов генов ретиноидного каскада или ретиноидных ядерных рецепторов за исключением одной двух редких мутаций в одиночных родословных. Эти данные показывают, что ко-локализация найденная при LOAD неслучайна. Мы полагаем, что эти ретиноидные гены в LOAD-сцепленных локусах являются специфическими кандидатами на LOAD.
Приведенные выше генетические данные подтверждают нашу гипотезу, что гипофункционирование ретиноида является ключевым фактором в развитии токсичности, вызываемой Aβ пептидами, которые образуют Alzheimer бляшки. Это особенно уместно в свете связанного с возрастом снижения снабжения ретиноидами или передачи сигналов ретиноидов как в норме, так и в большей степени при LOAD (Jimenez-Jimenez et al., 1999). Достоверно сниженные уровни ретиноидов, по-видимому, специфичны для LOAD, т.к. подобных различий не обнаружено в генеральной популяции стареющих людей с нарушениями памяти (Perkins et al, 1999).
APPLICATIONS TO PREVENTION, THERAPY, AND DETECTION
Биохимические результаты подтверждают снижение снабжения, синтеза ретиноидами, нарушение транспорта и гипофункцию в качестве факторов, вносящих свой вклад в LOAD. Эти находки предлагают способные к тестированию эксперименты для определения, может ли увеличение снабжения ретиноидами головного мозга, возможно посредством фармакологического наведения на цель RA рецепторов и цитохром P450 RA-инактивирующих энзимов, предупреждать потерю нейронов или снижать образование амилоидных бляшек. Подходы с малыми молекулами, предложены для улучшения нейральных процессов и синаптической пластичности взрослых при LOAD (Etchamendy et al., 2001; Goodman and Pardee, 2003; Corcoran et al., 2004; Farooqui et al., 2004; Prinzen et al., 2005; Sahin et al., 2005; Jacobs et al., 2006; Longo et al., 2006) и для коррекции TTR патологии (Almeida et al, 2005). Увеличение синтеза или уменьшение деградации RA д. менять транскрипцию retinoid генов мишеней. Имеются важные исследования на молекулах, ингибирующих CYP26 RA деградацию и такие работы суммированы в деталях Goodman et al. (in press). Специфические CYP26 ингибиторы, напр., liarazole или более недавно разработанные соединения (Pautus et al., 2006), могут быть использованы для увеличения RA; низкие концентрации могут быть необходимы, т.к ксенобиотики часто индуцируют белки, участвующие в их детоксификации. Т.к. слишком большие количества RA снижают нейрогенез (Crandall et al., 2004), то могут быть проблемы с токсичностью аналогов RA или деактивирующими энзимами. Альтернативно мы предлагаем добавление посредством предшественников RA, напр., retinol или retinyl эфиров, находящихся в chylomicrons (Goodman and Pardee, 2003). В самом деле, retinol может быть более эффективным для дестабилизации уже сформированных Aβ фибрилл, чем RA (Ono et al., 2004).
RAR/RXR agonists
Тысячи retinoids синтезированы и некоторые из них могут быть эффективными против AD (Etchamendy et al., 2001; Goodman and Pardee, 2003; Prinzen et al., 2005). Недавние сообщения предложили использование RXR гетеродимеров. которые регулируют экспрессию, секрецию APOE и гомеостаз холестерола при LOAD (Liang et al., 2004). Повышенное специфическое связывание RA с RARG/RARA гетеродимер-регулируемой транскрипцией IDE (Melino et al., 1996) может вызывать деградацию бляшек путем увеличения IDE (Bertram et al., 2000). Альтернативно, предложения с использованием таргетинга RXRG. Гетеродимер RARG/RXRG регулирует атипичную экспрессию CYP26A1 (Loudig et al., 2005), которой можно манипулировать с помощью receptor ligand агонистов (Pautus et al., 2006). Однако, терапия ретиноидами ограничивается токсичностью и лишь немногие ретиноиды лицензированы для клинического использования для лечения угревой сыпи. псориаза, острой promyelocytic лейкемии, Kaposi's сарком и др. различных раковых опухолей. Наиболее широко используется и изучен аналог RA, Accutane (13-cis RA), как было показано, он увеличивает депрессию у мышей (O'Reilly et al., 2006) и возможно психиатрические нарушения у людей (McCaffery et al., 2006), увеличивает лечение в психиатрических заведениях (Friedman et al., 2006), увеличивает риск факторов атеросклероза (De Marchi et al., 2006), вызывает нарушения мозговой функции, снижает метаболизм головного мозга (Bremner et al., 2005) и вызывает снижение нейрогенеза и способности к обучению у экспозированных мышей (Crandall et al., 2004). Accutane увеличивает риск сходных с LOAD заболеваний, диабет, hypertriglyceridemia, и ожирение. Поэтому др. RA аналоги необходимо исследовать прежде чем применять клинически для лечения LOAD.
RBP4 as a target
Интересен среди ретиноидных аналогов fenretinide, (4-HPR), атипичный retinoid с retinoid и retinoid nuclear receptor-независимой активностями, сегодня он в Phase III клинических испытаний для рака груди, простаты и ЦНС. Fenretinide, как было показано эффективен в снижении повышенного содержания в сыворотке RBP4 у толерантных к глюкозе тучных, мышей, моделирующих диабет type 2, что приводит к улучшению действия инсулина и толерантности к глюкозе (Yang et al., 2005). Как показано в Table 1, RBP4 находится в 10q23.3 локусе, часто сцепленным с LOAD, хотя, как сегодня известно, этот ген не был исследован как LOAD кандидат. Т.к. RBP4/TTR комплекс является механизмом для транспорта retinol через хороидное сплетение в головной мозг (Herbert et al., 1986), то этот комплекс может быть новой мишенью для терапевтического воздействия при LOAD. Такое использование может увеличивать снабжение несвязанным retinol в головном мозге и увеличивать способность TTR очищать головной мозг от Aβ. Целью в конечном итоге д. стать восстановление поврежденных нейронов, влияющих на обучение и память.
Мы предлагаем парадигму для предупреждения LOAD путем увеличения снабжения ретиноидом посредством модуляции энзимов и транспортеров ретиноидного каскада. Это сходно с предупреждением заболеваний сердца с помощью статинов, которые блокируют cholesterol-синтезирующие энзимы (Goodman, 1991).