Зависимость ОсаВ является функцией точности последовательностей октамерного мотива. Oct факторы м. димеризоваться на октамерных элементах таким образом, чтобы разрешить или предварить взаимодействие ОсаВ с промотором. OcaB-permissive octamers (POREs) содержат консенсусные последовательности ATTTGAAATGCAAAT, тогда как OcaB-refractory octamers (MOREs) характеризуются ATGCATATGCAT палиндромным мотивом. Октамеры тяжелой цепи являются структурными аналогами MORE мотивов, это объясняет, почему ОсаВ не взаимодействует VH промоторами in vivo. Напротив ОсаВ взаимодействует с октамерами легких цепей, данные эксперименты показали, что это взаимодействие является физиологическим. Следовательно, октамеры легких цепей являются высоко гомологичными POREs типа мотивам.
Если ОсаВ взаимодействует с Vκ октамерами, тоогда почему он необходим для экспрессии только генокоторых Vκ генов? В хорошо охарактеризованном SP6 Vκ промоторе, напр., октамерный мотив окружен позитивными контрольными элементами, ка полагают, взаимодействующими с EBF, СИА-Фб AP4, PU.1 транскрипционными факторами. Т.к. октамерный мотив законсервирован во врех Vκ промоторах, то костимулирующие элементы ограничены специфическими Vκ семействами. Несмотря на эти структурные различия, предполагается, что в близи энхансера промоторы Ig генов выполняют одну и ту же функцию с одинаковой эффективностью. Данные этого исследования ясно демонстрируют, что это не так; авт. обнаружили, что при физиологических условиях транскрипция Vκ гетерогенна. Эта гетерогенность, которая скорее всего обусловлена неравным распределением костимулирующих элементов среди Vκ генов, и предопределяет, будет ли данная легкая цепь функциональной в отсуствии ОсаВ. VκαHEL и Vκ8 промоторы, которые функционируют неизменно у ОсаВ-/- мышей, содержат раннее неохарактеризованный костимвлирующий элемент в 18 п.н.. локализованный ниже сайта инициации транскрипции. Этот элемент оказывает выраженный стимлирующий эффект на активность промотора Vκ4 в линиях трансфицированных клеток даже в отсуствие ОсаВ. Кроме того, этот элемент соединяется с фактором, присутствующим в ядрах клеток HeLa и Namalwa В клеток и усиливает транскрипцию непосредственно in vitro. Хотя этот в 18 п.н. элемент находится ниже сайта инициации он м. также влиять на стабильность мРНК, авт. полагают, что этот элемент делает ОсаВ лишним в экспрессии Vκ8 или V&kappaαHEL in vivo. Напротив, транскрипция генов, в которых отсутствуют такой компенсаторный мотив (Vκ3-83 и Vκ4), падает ниже необходимого физиологического уровня в отсуствие ОсаВ.
A Transcriptional Threshold for V(D)J Recombination
Экспрессия Ig генов существенна для V(D)J рекомбинации, базирующейся на прямой корреляции между началом germline транскрипции и рекомбинацией генов антител. Целенаправленные делеции транскрипционных регуляторных элементов нарушают и экспрессию и рекомбинацию TCR и Ig генов in vivo. Сходным образом, у IL7R-/- мышей germline транскрипция специфически замалчивается в удаленных VH генах, которые неспособны рекомбинировать с DJH сегментами. Опять же рекомбинация V(D)J м.б. индуцирована в нелимфоидных клетках после экспрессии RAG1 и RAG2 плюс E2A транскрипционного фактора. Несмотря на эти наблюдаения потребности в транскрипции при V(D)J рекомбинации не были выявлены.
В отсутствие ОсаВ Igκ хроматиновый домен доступен, на этоу указывают измерения деметилирования ДНК и ацетилирования гистонов. Более того, Oct-1 и базовая транскрипционная кухня рекрутируются к промотору гена легкой цепи и Igκ гены транскрибируются, хотя и на субоптимальном уровне. Несмотря на это V(D)J рекомбинация нарушена в субнаборе Vκ генов в отсутствие ОсаВ. Данные настоящей работы показывают, что ОсаВ , транскрипционный коактиватор, контролирует рекомбинауию генов антител, регулируя эффективность экспрессии Vκ генов. Предполагается, что открытый хроматин и специфический порог транскрипции необходимы для гарантии сборки Ig генов. В отсутствие ОсаВ слабые промоторы падают ниже порога, тогда как более мощные промоторы, т.е. те, что экипированы дополнительными транскрипционными элементами, будут сохранять достаточную активность, чтобы избежать рекомбинаторного паралича.