X-chromosome-linked Inhibitor of Apoptosis (XIAP)
Ингибитор Апоптоза XIAP и его контроль

XIAP, the guardian angel

Martin Holcik & Robert G. Korneluk
Nature Reviews Molecular Cell Biology 2, 550-556 (2001)

Клеточный ингибитор апоптоза, XIAP, критический регулятор каспаз, сам является объектом сложной негативной регуляции. Одна группа апоптических регуляторов, inhibitor of apoptosis (IAP) (Box 1),представляет наиболее мощные ингибиторы клеточной гибели и в принцие м.б. использована для терапии. Среди IAPs,  X-chromosome-linked inhibitor of apoptosis (XIAP) является наиболее  сильным и многосторонним регулятором клеточной гибели.
Boxes
Box 1 | The IAP family
The inhibitor of apoptosis (IAP) proteins are intrinsic cellular regulators of programmed cell death. They were first described in baculoviruses, in which their role is to block the apoptotic response that is initiated as a defence mechanism in response to viral infection. The homologues of viral IAPs were soon discovered in metazoan species, including Caenorhabditis elegans, yeast, Drosophila melanogaster и vertebrates. Seven mammalian IAPs are known, but the list is still growing. IAPs are potent inhibitors of apoptosis induced by various triggers both in vitro иin vivo, by virtue of their ability to bind и inhibit distinct caspases. Significantly, IAPs are the only endogenous inhibitors that block both the initiator и effector caspases.

The IAPs are defined by an 80 amino-acid zinc-finger motif called the baculoviral IAP repeat (BIR; (Рис.1.) The number of BIR domains in a given IAP is variable, ranging from one to three, but they are invariably present at the amino terminus of the protein и mediate the interaction with caspases. Several, but not all, IAPs also contain a carboxy-terminal RING (really interesting new gene) zinc finger, which has been recently recognized to have E3 ubiquitin ligase activity.

Links

DATABASE LINKS
XIAP | Bcl-2 | cytochrome c | Fas | caspase-9 | caspase-3 | caspase-7 | HIAP1 | HIAP2 | Apaf-1 | Hid | Reaper | Grim | XAF1 | cyclin A | cyclin D1 | p21Cip1/Waf1 | p27Kip1 | Akt
FURTHER INFORMATION
Holcik lab



КОНКУРЕНЦИЯ за XIAP

Emad Alnemri и др. показали, что клетки м. избегать гибели благодаря привлечению активированной caspase-9 своего собственного ингибитора.
Каспазный путь, отвечающий на большинство death стимулов, тонко регулируется, он связан с соединением слабо активной procaspase-9 с адапторной молекулой Apaf-1. Procaspase-9 подвергается процессингу с помощью аутопротеолитического расщепления, дающего активную каспазу-9.
Известно, что caspase-9 м. ингибироваться с помощью X-linked inhibitor of apoptosis protein ( XIAP). Авт. сконструировали in vitro, caspase-9-Apaf-1 комплексы, содержащие или полностью processed caspase-9 или прокаспазную форму. Хотя оба комплекса были каталитически активны , только полностью processed caspase-9 м. ингибироваться с помощью XIAP. Это не удивительно, т.е. XIAP не м. ассоциировать с unprocessed procaspase-9.
Авт. идентифицировали законсервированный мотив в 4 аминокислотных остатка, который окзывается экспозированным на N-конце малой субъединицы caspase-9 после ее протеолитического процессинга. Этот мотив обнаруживает существенную гомологию с последовательностями, которые связывают IAPs в Drosophila death белках Grim, Reaper и Hid. Системные мутации остатков в этом мотиве подтвержддают, что они необходимы для связывания XIAP каспазой-9.
Ингибрование caspase-9 м.б. преодолено с помощью белка, наз. Smac/DIABLO, который также взаимодействует с XIAP и также содержит законсервированные 4 остатка на своем N-конце. Alnemri и др. установили, что в caspase-9 IAP-связывающий мотив устраняет связывание Smac/DIABLO с XIAP (и vice versa).
Итак, "Smac конкурирует с caspase-9 за связывание одного и того же карманана поверхности XIAP, это м. объяснить способность Smac способстовать каталитической активности caspase-9 в присутствии XIAP". Авт. подчеркивают, в отличие от др. каспаз, протеолитический процессинг caspase-9 необходим для ее ингибирования скорее, чем для активации. И как полагает Donald Nicholson эти результаты м.б. использованы для лечения рака, т.к. синтетические заменители XIAP-связывающих пептидов могли бы сенсибилизировать опухолевые клетки к апоптическим стимулам.

ORIGINAL RESEARCH PAPER Srinivasula, S. M. et al. A conserved XIAP-interaction motif in caspase-9 and Smac/DIABLO regulates caspase activity and apoptosis. Nature 410, 112-116 (2001) | Article | PubMed | ISI |
FURTHER READING Nicholson, D. W. Caspases bait inhibitors. Nature 410, 33-34 (2001) | Article | PubMed | ISI |
Chai, J. et al.Structural basis of caspase-7 inhibition by XIAP. Cell 104, 769-780 (2001) | PubMed | ISI |
Huang, Y. et al.Structural basis of caspase inhibition by XIAP: differential roles of the linker versus the BIR domain. Cell 104, 781-790 (2001) | PubMed | ISI |
Riedl, S. J. et al.Structural basis for the inhibition of caspase-3 by XIAP. Cell, 104, 791-800 (2001) | PubMed | ISI |


Inhibition by XIAP

Апоптоз осуществляется с помощью семейства специфических протеаз, известных как caspases
(Box 2) | Caspase activation

цистеиновые протеазы, которые расщепляют свой субстрат после законсервированного остатка аспартата. Препятствуют деструкции клеток с помощью каспаз два класса клеточных апоптических ингибиторов, члены Bcl-2 и IAP семейств генов. Тогда как  Bcl-2 белки м. блокировать только митохондриальную ветвь апоптоза, предупреждая высвобождение cytochrome c, то IAPs блокируют оба и  mitochondria- и death-receptor-(Fas)-опосредованные пути апоптоза, благодаря непосредственному связыванию и ингибированию как инициаторных, так и эффекторных каспаз. IAPs, по-видимому, многофункциональные белки, которые регулируют апоптоз и кроме того участвуют в клеточных процессах, таких как рецепторами опосредованной передаче сигналов, клеточном цикле и ubiquitylation.
Эта многофункциональность отражается и модулярной структуре IAPs, котороая лучше всего охарактеризована у XIAP (Рис. 1). Модулярная структура характерна и для большинства др. IAPs (Table 1). Молекулярный механизм, с помощью которого XIAP регулирует апоптоз, начинает выясняться. Установлено, что домены baculoviral inhibitor of apoptosis repeat (BIR; Box 1) м.б. важными для функции XIAP ингибирования каспаз, т.к. эти домены связывабтся непосредственно с определенными каспазами. XIAP ингибирует как initiator caspase-9 , effector caspases-3 и -7. In vitro было показано, что XIAP наиболее мощный ингибитор каспаз  Ki значениями 0.2 - 0.8 nM по сравнению с 1–20-nM для др. членов семейства IAP.

(Рис.1.)  |  XIAP is a modular protein.

XIAP BIR domains

BIR домены в XIAP м. выполнять разные функции и XIAP м. поэтому ингибировать каспазы разными способами. Активность XIAP, ингибирующая  caspase-3- и caspase-7, локализуется во втором BIR домене(BIR2), но она нуждается также в остатках, обнаруживаемых в линкерной области, предшествующей BIR2 (Рис.1). Установлено, что изолированный BIR3 домен достаточен для ингибирования caspase-9. Хотя трехмерные структуры  BIR2 и BIR3 из XIAP показывают, что эти два домена очень сходны , однако найдены разные наборы аминокислотных остатков, критические для ингибирования определенных каспаз
The XIAP BIR2 domain. Кристаллическая структура caspase-7, скомплексованной с ингибирующим фрагментом XIAP (аминокислотные остатки 124–240) показала, что XIAP пептид связан с каталитической бороздой каспазы-7, полностью заполняя активный сайт и тем самым препятсвуя вхождению др. субстратов. Сходное структурное расположение обнаружено и между XIAP и каспазой-3. Принимая во внимание, что каспаза-3 и каспаза-7 имеют54% идентичных последовательностей и имеют почти идентчиную стержневую структуру, это не удививтельно.  Несмотря на тот факт, что XIAP не имеет каких-либо общих мотивов в природными субстратами каспаз, взаимодействия между каспазами-3/7 и XIAP сходны с таковыми между каспазами и синтетическим тетрапептидным ингибитором  DEVD-CHO. Интересно, что связывание XIAP является антипараллельным связыванию натурального субстрата каспазами. 4 аминокислотных остатка XIAP — Gly144, Val146, Val147 и Asp148 — формируют или водородные мостики с субстрат-связывающими сайтами S1, S2, S3 и S4 каспазы-7, соотв., Asp148 является при этом критическим для docking взаимодействия. Связываение  XIAP с каспазой-3 осуществляется сходным образом, теми же самыми остатками.
Взаимодействующие с каспазой остатки, включая и Asp148, законсервированы у XIAP и двух др IAP белков, HIAP1 (cIAP2) и HIAP2 (cIAP1), которые также  ингибируют эффекторные каспазы-3 и -7. Однако, эти критические остатки найдены не в самом BIR2, а в короткой линкерной области, которая предшествует BIR2. BIR2 домен сам по себе м.б. несущественным и м.б. заменен неродственным белком, таким как glutathione S-transferase (GST). Домен BIR2, как полагают, стабилизирует взаимодействие между каспазами и XIAP, и м. обеспечивать взаимодействия с др. IAP-связывающими белками
The XIAP BIR3 domain. Уникальным свойством IAPs является то, что они ингибируюткак эффекторные, так и инициаторные каспазы. Механизм, с помощью которого XIAP ингибирует инициаторную каспазу-9, является совершенно отличным.
Установлено, что BIR3 домен XIAP только сам отвечает за ингибирование каспазы-9. Интересно, что XIAP связывает только processed каспазу-9 — но не неактивную прокаспазу-9. Аутокаталитический процессинг каспазы-9 в Asp315 (после рекрутирования прокаспаза-9 олигомеризуется с помощью apoptotic protease-activating factor (Apaf-1) внутри апоптосомы; (Box 2) высвобождает p12 субъединицу каспазыв-9 с  'новым' свободным N-концом, который взаимодействует непосредственно с XIAP BIR3 доменом (Рис. 2). 2). Делеция или мутагенез 4-х аминокислотных остатков в  p12 субъединице (Ala-Thr-Pro-Phe) устраняет связывание каспазы-9 с XIAP. Более того, если аминокислотные последовательности после процессинга каспазы-3 (которая обычно не взаимодейтвует с iXIAP BIR3) изменены так как после процессинга каспазы-9, то она строго связывает XIAP BIR3, указывая тем самым, что последовательности тетрапептида каспазы-9 после процессингша обеспечивают специфичность к BIR3домену XIAP.

(Рис.2.)  |  BIR3 domain of XIAP binds cleaved caspase-9.

The XIAP BIR1 domain. Функция BIR1 домена XIAP неясна, и нет данных указывающих, что BIR1 м. ингибировать каспазы. Укороченный XIAP только с  BIR1 не м. взаимодействовать с caspase-3 или caspase-7, и не ингибирует Fas-iиндуцированный апоптоз. Возможно, что BIR1 домен функционирует только стабилизируя XIAP. Предполагается, однако, что BIR1 взаимодействует с  — и ингибирует — с еще не идентифицированными каспазами. Или BIR1 создает interface для связывания с новым классом IAP-взаимодействующих белков, которые м. модифицировать активность XIAP .

One protein, many domains

Установлено, что XIAP ассоциирует с апоптосомами. В этом комплексе  XIAP взаимодействует с каспазами-3 и -9, и , по-видимому. предотвращает активацию не только caspase-3 с помощью caspase-9, но и высвобождает каспазу-3 из апоптосом.
Т.к. каждая каспаза взаимодействует с разными BIR доменами XIAP — особенно, caspase-3 и caspase-7 с BIR2, и caspase-9 с BIR3 — то цель двойного ингибирования м.б. достигнута скоре с помощью одного белка, чем двух (Рис.3 ). Или эволюция двух механизмов ингибирования каспаз с помощью одного и того же белка сделала возможным два способа регуляции. Напр., гипотетический белок, который будет блокировать взаимодействие между XIAP и caspase-9 не будет затрагивать взаимодействие между XIAP и caspase-3/7. Напротив, ингибирование способности XIAP блокировать каспазы-3/7 будет оставлять ее активность против caspase-9 интактной. Т.к. каспазы вовлекаются и в процессы иные , чем убийство клеток (напр., воспаление или дифференцировка), то эволюция модулярного каспазного ингибитора — такого как XIAP — должна позволять несколько уровней регуляции каспаз в разлиных физиологических условиях.

(Рис.3.)  |  XIAP associates with the apoptosome.

Хотя BIR2 и BIR3 домены XIAP связывают соотв. каспазы структурно отличными способами, взаимодействие и последующее ингибирование в обоих случаях обратимо.  Это нахродится в резком контрасте к ингибирующей активности широкого спектра baculoviral  ингибитора каспаз белка p35, который не делает различий между каспазами и действует, формируя ковалентные  thioester связи с  каспазами-мишенями. Структурные различия между XIAP и p35 ингибитором, по-видимому, объясняют их различные биологические функции.  Белок p35 функционирует как апоптический 'off' переключатель, блокируя апоптоз, который запускается в ответ на сирусную инфекцию (и , следовательно, имеет целью блокировать размножение вирусов). Напротив, XIAP является ингибитором внутренних каспаз, которые модулируют (more like a throttle control) какскд каспаз в ответ на различные внкелеточные и внутриклеточные стимулы.
Любая активация каспаз, будучи неконтролируемой, быстро ведет к амплификации каспазного каскада и, наконец, к гибели клетки. Такой исход нежелателен при условиях временного клеточного стресса (таких как лишение пищи и кислорода), и XIAP должен контролировать инициальную активацию каспаз и предупреждать запуск каспазного каскада. Однако, полное подавление каспаз также нежелательно, т.к. клетки, которые повреждены, вредны для организма, если не будут удаляться. (Действително, наивысшая резистентность к апоптозу характеризует опухолевые клетки.) Следовательно, способность XIAP высвобождать свои каспазы-мишени должна регулироваться и клетки должнф иметь механизмы для этого.

Inhibiting the inhibitors

Smac/DIABLO. Митохондриальный белок, который негативно регулирует caspase-inhibiting активность IAPs выявлен недавно и назван second mitochondria-derived activator of caspase (Smac) или DIABLO. Связывание Smac/DIABLO с IAPs разрушает связывание IAPs с каспазами и способствует апоптозу. Smac/DIABLO синтезируется как белок-предшественник, который направляется в митохондрии, где его 55 аминокислот с N-конца , отвечающих за его таргетинг в митохондрии, удаляются. Отщепление targeting последовательностей существенно для роли Smac/DIABLO в апоптозе, т.к. обеспечивает экспозицию тетрапептидных последовательностей (Ala-Val-Pro-Ile), которые являются критическими для связывания Smac/DIABLO с IAPs. Зрелые Smac/DIABLO высвобождаются из митохондрий вместе с цитохромом c во время митохондриями-индуцированного апоптоза  и взаимодействуют с некоторыми IAP протеинами, включая XIAP, HIAP1, HIAP2 и survivin. Структурные основы взаимодействия между Smac/DIABLO и XIAP установлены и проливают новый свет на регуляцию апоптичского процесса.
Smac/DIABLO взаимодействует с BIR2 и BIR3 доменами XIAP. Кристаллическая структура Smac/DIABLO указывает на то. что он формирует гомодимер благодаря большому гидрофобному interface, и что гомодимеризация существенна для его связывания с BIR2, но не BIR3,домена XIAP. 4 аминокислотных остатка Smac/DIABLO (Ala-Val-Pro-Ile) образуют специфический контакт с поверхностью борозды BIR2 и BIR3 доменов, но не с BIR1 доменом XIAP (Рис. 2). Сильно законсервированный тетрапептидный мотив обнаруживает удивительную гомологию с IAP-взаимодействующим мотивом, обнаруженным в  p12 N-терминальных последовательностях каспазы-9 (Ala-Thr-Pro-Phe) и белков Drosophila Hid (Ala-Val-Pro-Phe), Reaper (Ala-Val-Ala-Phe) и Grim (Ala-Ile-Ala-Tyr).

Grim, Reaper и Hid инициируют эмбриональный апоптоз у Drosophila двумя способами. Они м. прямо вовлекаться в путь передачи про-апоптических сигналов. Однако, все три белка выступают в качестве непосредственных антогонистов  Drosophila IAPs, так что они м. высвобождать каспазный каскад. Эта IAP-ингибирующая активность локализуется на N-конце Grim, Reaper и Hid. Smac/DIABLO является их функциональным аналогом. Действительно, весь новый класс белков с IAP-взаимодействующим мотивом, должен регулировать функции IAP. Интересен факт, что процессинг каспазы-9 делает доступным мотив, который взаимодействует с IAPs, указывая тем самым, что новый класс белков м.б. активирован с помощью каспаз или др. клеточных протеаз.

Соединение Smac/DIABLO и каспазы-9 с XIAP исключительно, оба белка облают сходным сродством к BIR3 домену. Это не объясняет, однако, как Smac/DIABLO м. активировать каспазный каскад, т.к. он конкурирет с каспазой-9 за XIAP. Предполагается, что XIAP м. взаимодействовать только с активированной (processed) формой каспазы-9,  XIAP ативность же м.б. блокирована с помощью Smac/DIABLO прежде чем произойдет эта активация. Кроме того Smac/DIABLO пептид соединяется с  BIR3 борозкой, вторым interface взаимодействия, образуемого Smac/DIABLO спиралью, усиливая связь с XIAP. Когда каспазный каскад активирован, то каспаза-9 далее подвергается процессингу с помощью каспазы-3 по Asp330 остатку в p10 субъединицу, в результате удаления короткой линкерной области. Эта линкерная область содержит IAP-взаимодействующий мотив, который, по крайней мере in vitro, м. связывать и ингибировать XIAP. Итак, как в петле положительной обратной связи, активированная каспаза-9 отделяет decoy пептид, который препятствует XIAP ингибировать активность каспазы-9 (Fig. 2).
Путь, с помощью которого XIAP осуществляет ингибирование caspase-3/7, механистически иной и как полагают используется для сенсибилизации клеток типа II, которые обычно резистентны к апоптозу, индуцированному death-receptor. Т.к. XIAP связывает caspase-3/7 своей линкерной областью, то эта связь не касается BIR2 домена, который поэтому свободен для связи Smac/DIABLO. Соединение Smac/DIABLO с XIAP, по-видимому, дестабилизирует взаимодействие XIAP–caspase путем steric hindrance, вызывая разрушение комплекса XIAP–caspase. Кроме того, связывание Smac/DIABLO с BIR2 доменом XIAP должно вызывать конформационное изменение XIAP, ведущее к снижению сродства XIAP к caspase-3/7.
Интересно, Smac/DIABLO м. связываться только с одним BIR в одно врем, а мономерный Smac/DIABLO не взаимодействует с  BIR2 — только с BIR3. Если эти ограничения существуют и in vivo, то вообще-то д.б. дополнительные механизмы для регуляции взаимодействий  между Smac/DIABLO и XIAP. Более того, Smac/DIABLO обладает про-апоптической активностью, которая не зависит от N-терминального тетрапептида. Основа этого механизма, который вероятно не зависит от связывания IAPs, неизвестен.
Как Smac/DIABLO м индуцировать апоптоз, связываясь с XIAP, если последний не соединяется с неактивированными каспазами? Предполагается.,что каспазы выполняют и др. важные клеточные функции (участвуют в дифференци ровке, воспалительных реакцияхи межклеточных эффектах), которые независимы от апоптоза и что низкие уровни активных каспаз м. присутствовать в клетках. Итак,  XIAP м. связывать эти активированые каспазы и удерживать их от неадекватного старта каспазного каскада. Высвобождения зрелого Smac/DIABLO в цитоплазму  м. оказаться достаточно, чтобы снять ингибирование каспаз с помощью XIAP и активировать апоптоз.
XAF1. Идентифицирован др. XIAP-взаимодействующий белок, названный  XIAP-associated factor 1 (XAF1). Он содержит 7 цинковых пальчиков и противодействует способности XIAP супрессировать активность каспаз и гибель клеток in vitro. Нет данных о механизме такго ингибирования и о доменах взаимодействия XIAP и XAF1. В противоположность Smac/DIABLO, XAF1 не нуждается в процессинге, и, по-видимому, постоянно готов к взаимодействию и ингибированию XIAP. В отличие от XIAP, который обнаруживается сначала в цитоплазме, эндогенный  XAF1 находится в ядре. Различия в компартментализации XIAP и XAF1 вызывают вопрос, как эти два белка м. взаимодейстовать — транслоцируется ли XAF1 в цитоплазму, где ингибирует XIAP, или XIAP вступает в ядро, где секвестрируется с помощью XAF1?
Ответа нет, но предполагается, что ингибирование происходит в ядре. Возможно каспаза-3 участвует в апоптической деструкции ядра, т.к. протеолитически расщепляет некоторые ядерные субстраты.  Однако, caspase-3 обнаруживается в основном в цитоплазме. Однако, установлено, что каспаза-9 м. разрушать ядерную мембрану и увеличивать диффузию, меняя размеры ядреных пор. Это м. вести к транспорту больших белковых комплексов. содержащих каспазу-3, в ядро. Т.к. XIAP связан с каспазой-3, то очевидно он также транспортируется в ядро с  caspase-3 protein комплесом, где продолжает ингибировать активность каспазы-3. Эта экстивность затем устраняется ядерным XAF1, также как осуществляется цитоплазматическая ингибиция iXIAP с помощью Smac/DIABLO.
Локализация в разных компартментах Smac/DIABLO и XAF1 отражает потребность в контроле всех ветвей апоптоза на разных клеточных уровнях. Так как Smac/DIABLO секвестрируется в митохондриях он функционален толтько в апоптозе, опосредованном митохондриями. XAF1, с др. стороны, постоянно присутствует в ядре, так что он м. эффективно способствовать прогрессии апоптоза независимо от типа вовлекаемых initiator caspase. Или, XAF1 регулирует активность XIAP, согласуясь с контролем клеточного цикла. Предполагается, что XIAP участвует в контроле клеточного цикла, подавляя cyclins A иD1, и индуцируя циклин-зависимые киназные ингибиторы p21Cip1/Waf1 и p27Kip1.

Concluding remarks

Итак, предполагается, что XIAP играет центральную роль ингибитора апоптоза в запрограммированой гибели клеток (Рис. 4). Открытие белков, которые взаимодействуют с  XIAP и модулируют его антиапоптическую активность, подчеркивает критическую роль XIAP в клеточном гомеостазе. Избыточная экспрессия XIAP защищает клетки от дивиргентных апоптических триггеров, включая УФЛ,  γ-облучение и лекарства. Мыши с целенаправленной делецией XIAP нормальные и не обнаруживают признаков аномального апоптоза. Потеря XIAP, однако, сопровождается увеличением уровня HIAP1 и HIAP2, указывая тем самым, что активность IAP является критической для для выживания клеток и что потеря XIAP компенсируется.

(Рис.4.)  |  Proposed model for the centrality of XIAP in caspase regulation.

Спосоность модулирования активности XIAP клеточными белками важна для подержания тонкого контрол апоптических процессов и если она отключена то это приведет к раку. Антогонист XIAP, XAF1,является репрессором опухолей. XAF1 экспрессируется повсеместно во всех взрослых и плодных тканях, но присутствует в очень низких количествах в различных опухолевых линиях. Напротив, уровень XIAP относительно высок в большинстве опухолей, указывая тем самым. что XAF1 м.б. критическим в обеспечении устойчивости опухолевых клеток за счет падения контроля антиапоптической активности XIAP.
Установлено. что избыточная экспрессия XAF1 ведет к транслокации эндогенного XIAP в ядро. Интересно, что при некоторых апоптических условиях эндогенный  XIAP м. обнаруживаться и в ядре.  Яерный XIAP ко-локализуется с caspase-3. Инъекции зрелого Smac/DIABLO в некоторых случаях недостаточно для запуска апоптоза. В таких случаях XIAP м.б. невосприимчивым к ингибированию с помощью Smac/DIABLO. Вообще XIAP д.б. в состоянии 'конформационной готовности', которая создается пост-транскрипционными модификациями, такими как фосфорилирование. Ничего неизвестно о статусе фосфорилирования XIAP, даже если XIAP последовательности содержат ряд консенсусных сайтов фосфорилирования для некоторых протеин киназ, включая Akt и Jun amino-terminal kinase (JNK). Наконец, открытие специфического IAP-взаимодействуюдщего мотива указывает на возможность существования др. белков, взаимодействующих с IAP. Эти белки д. иметь высокую специфичность к индивидуальным BIR доменам.



Сайт создан в системе uCoz