Korenjak, M. et al. Native E2F/RBF complexes contain Myb-interacting proteins and repress transcription of developmentally controlled E2F target genes. Cell119, 181–193 (2004)
| |
FURTHER READING Lewis, P. W. et al. Identification of a Drosophila Myb-E2F2/RBF transcriptional repressor complex. Genes Dev. 15 Nov 2004 (doi:10.1101/gad.1255204) |
Retinoblastoma tumour-suppressor protein (pRb) и семейство E2F транскрипционных факторов участвуют в росте и дифференцировке клеток за счёт координирования транскрипции генов. pRb м. репрессировать транскрипцию генов путём рекрутирования репрессорного комплекса на промоторы E2F-связанных генов. Alexander Brehm, Nick Dyson и др. выделили из эмбрионов Drosophila melanogaster два таких репрессорных комплекса — которые они назвали dREAM (по Drosophila RBF, E2F и Myb-взаимодействующим белкам).
D. melanogaster содержит два белка семейства pRb, и , и два E2F белка, и dE2F2, каждый из которых формирует гетеродимеры с транскрипционным фактором . Хроматографическое разделение ядреных экстрактов эмбрионов D. melanogaster выявили 3 фракции, которые содержат RBF1, из которых одна содержит два отдельных комплекса. Дальнейшая очистка показала, что эти два комплекса содержат компоненты из dMyb комплекса, который контролирует амплификацию хориональных генов в фолликулярных клетках, а также dE2F2, dDP и или RBF1 или RBF2.
Окрашивание политенных хромосом антителами против различных субъединиц dREAM обнаружило обширную совместную локализацию между этими субъединицами. Однако, использование антител против фосфорилированной RNA polymerase II показало отсутствие перекрывания между двумя паттернами окрашивания, это указывает на то, что dREAM комплексы ассоциируют с транскрипционно молчащими регионами.
Как же dREAM репрессирует транскрипцию? Т.к. dREAM комплексы, по-видимому, лишены хроматин-модифицирующих энзимов, то Brehm, Dyson и др. попытались узнать, не репрессируют ли комплексы dREAM транскрипцию с помощью связывания непосредственно с гистонами. В самом деле, некоторые субъединицы соединяются с не-ацетилированными хвостами гистонов H4, но они были неспособны связываться с этими хвостами, когда histone-H4 хвосты были ацетилированы. Учитывая, что транскрипционно молчащий хроматин обычно деацетилирован, авт. предположили, что с помощью связывания с не ацетилированным нуклеосомами dREAM комплексы м. защищать их от модификации, поддерживая тем самым репрессивное состояние.
Чтобы идентифицировать гены, которые регулируются с помощью dREAM, авт. истощали субъединицы dREAM обрабатывая D. melanogaster S2 клетки RNAi. Сфокусировавшись на двух наборах -регулируемых генов - клеточным циклом регулируемых A-группы и E-группы генов, которые имеют пол- и дифференциация-специфические паттерны экспрессии - они установили, что деплеция субъединиц dREAM де-репрессирует гены E-группы, но не гены A-группы.
Интересно, что 7 из 8 компонентов dREAM были родственны продуктам Caenorhabditis elegans synMuv class-B генов, которые важны для развития мужской и женской репродуктивных систем червей. Brehm, Dyson и др. предположили, что белки synMuv class-B формируют комплекс, который подобно dREAM, репрессирует связанные с полом гены-мишени и тем самым контролирует половое развитие червей. Итак, эволюционная консервация pRb-специфичных репрессорных комплексов достаточно обширна и авт. предсказывают, что 'dREAM-подобные' комплексы м. существовать и у млекопитающих.