KREISLER


	Изучали с помощью in situ hybridization, экспрессию 5 ромбомер-специфичных генов у эмбрионов мыши, гомозиготных по мутации kreisler (kr), у которых ромбомеры 4-7 замещены гладкой морфологически несегментированной нервной трубкой. Используя молекулярные зонды, специфичные для Hoxb-1 (Hox-2.9), Hoxb-3 (Hox-2.7), Hoxb-4 (Hox-2.6), Krox-20, or Fgf-3 (Int-2) было показано, что мутация kr нарушает экспрессию всех исследованных генов, но аномальные паттерны экспрессии не ограничены областью мутантного заднего мозга, который морфологически аномальный. Границы ростральной экспрессии Hoxb-3 и Hoxb-4 смещены с их обычного положения в r4/5 и r6/7 в позиции r3/4 и r4/5, соответственно. Домены экспрессии Krox-20 и Fgf-3 также смещены в ростральном направлении и интенсивность гибридизации Fgf-3 сильно снижена. Домен экспрессии гена Hoxb-1 нарушается по другому в отличие от остальных генов у kr/kr эмбрионов; его ростральная граница в r3/4 остается интактной, но каудальная смещается из r4/5 в r5/6. Так как границы генной экспрессии Hoxb-1 и Hoxb-4 обнаруживаются в области заднего мозга kr/kr, где отсутствуют видимые ромбомеры, то возникновение региональной идентичности, по-видимому, не нуждается в видимой сегментации. Анализ производных НГ второй и третьей бранхиальных дуг, которые обычно возникают из ромбомеров 4 и 6, соответственно, показал, что гиоидная косточка у kr/kr мутантов имеет добавочный отросток на больших рогах ( greater horn (a third arch structure). Это м. объяснить эктопическим развитием структур второй бранхиальной дуги, малых рогов гиоидной кости (the hyoid lesser horn) в области, которая обычно происходит из третьей дуги (Frohman et al., 1993). Идентифицированы энхансеры из генов мыши и кур, достаточные для r5-ограниченной экспрессии Hoxb-3. Сравнение последовательностей выявило 2 блока сходства (из 19 и 45 base pairs), каждый из которых содержит in vitro сайты связывания для белка kreisler (Kmrl1), и Maf/b-Zip белка, экспрессирующегося в r5 и r6 . Оба сайта необходимы для r5 активности, указывая тем самым, что Hoxb-3 является непосредственной мишенью для kreisler. Мультимеры из 19-base-pair (bp) блока восоздают Krml1-подобный паттерн в r5/r6, но блок с 45-п.н. обеспечивает экспрессию только в r5. Следовательно, элементы внутри блока в 45-п.н. ограничены реакцией на Krml1. Идентифицированы дополнительные последовательности, которые содержат Ets-related сайт активации, необходимый как для активации, так и для ограничения ромбомером r5. Следовательно, Krml1 непосредственно активирует экспрессию Hoxb-3 в r5 в комбинации с Ets-related сайтом активации, и указывает на то, что kreisler играет первичную роль в регуляции сегментной идентичности с помощью Нох генов (Manzanares et al., 1997).

Изучали с помощью in situ hybridization, экспрессию 5 ромбомер-специфичных генов у эмбрионов мыши, гомозиготных по мутации kreisler (kr), у которых ромбомеры 4-7 замещены гладкой морфологически несегментированной нервной трубкой. Используя молекулярные зонды, специфичные для Hoxb-1 (Hox-2.9), Hoxb-3 (Hox-2.7), Hoxb-4 (Hox-2.6), Krox-20, or Fgf-3 (Int-2) было показано, что мутация kr нарушает экспрессию всех исследованных генов, но аномальные паттерны экспрессии не ограничены областью мутантного заднего мозга, который морфологически аномальный. Границы ростральной экспрессии Hoxb-3 и Hoxb-4 смещены с их обычного положения в r4/5 и r6/7 в позиции r3/4 и r4/5, соответственно. Домены экспрессии Krox-20 и Fgf-3 также смещены в ростральном направлении и интенсивность гибридизации Fgf-3 сильно снижена. Домен экспрессии гена Hoxb-1 нарушается по другому в отличие от остальных генов у kr/kr эмбрионов; его ростральная граница в r3/4 остается интактной, но каудальная смещается из r4/5 в r5/6. Так как границы генной экспрессии Hoxb-1 и Hoxb-4 обнаруживаются в области заднего мозга kr/kr, где отсутствуют видимые ромбомеры, то возникновение региональной идентичности, по-видимому, не нуждается в видимой сегментации. Анализ производных НГ второй и третьей бранхиальных дуг, которые обычно возникают из ромбомеров 4 и 6, соответственно, показал, что гиоидная косточка у kr/kr мутантов имеет добавочный отросток на больших рогах ( greater horn (a third arch structure). Это м. объяснить эктопическим развитием структур второй бранхиальной дуги, малых рогов гиоидной кости (the hyoid lesser horn) в области, которая обычно происходит из третьей дуги (Frohman et al., 1993).

Идентифицированы энхансеры из генов мыши и кур, достаточные для r5-ограниченной экспрессии Hoxb-3. Сравнение последовательностей выявило 2 блока сходства (из 19 и 45 base pairs), каждый из которых содержит in vitro сайты связывания для белка kreisler (Kmrl1), и Maf/b-Zip белка, экспрессирующегося в r5 и r6 . Оба сайта необходимы для r5 активности, указывая тем самым, что Hoxb-3 является непосредственной мишенью для kreisler. Мультимеры из 19-base-pair (bp) блока восоздают Krml1-подобный паттерн в r5/r6, но блок с 45-п.н. обеспечивает экспрессию только в r5. Следовательно, элементы внутри блока в 45-п.н. ограничены реакцией на Krml1. Идентифицированы дополнительные последовательности, которые содержат Ets-related сайт активации, необходимый как для активации, так и для ограничения ромбомером r5. Следовательно, Krml1 непосредственно активирует экспрессию Hoxb-3 в r5 в комбинации с Ets-related сайтом активации, и указывает на то, что kreisler играет первичную роль в регуляции сегментной идентичности с помощью Нох генов (Manzanares et al., 1997).