Marc Tini и др. описали взаимодействие энзима, участвующего в репарации ДНК — thymine DNA glycosylase (TDG) — с транскрипционными ко-активаторами CBP или p300. Возникающий комплекс активен как при репарации ДНК, так и транскрипции, следовательно, он функционирует в обоих процессах.

Tini и др. выявили CBP–TDG комплекс с помощью co-immunoprecipitation, GST (glutathione-S-transferase)-fusion-protein interaction assays и gel filtration фракционированных экстрактов клеток HeLa cell. Они выявили ко-локализацию белков in vivo. Сам CBP (нагруженный флюоресцентным белком) имеет гранулярное распрделение в ядре, а сам TDG обнаруживает диффузное окрашивание в ядре, тогда как их ко-экспрессия дает определенный макрогранулярный паттерн для обоих белков.

CBP–TDG комплекс обнаруживает высокое сродство к G/T mispaired duplex oligonucleotide — природному субстрату TDG — и способен расщеплять его (инициальная ступень процесса репарации). Напротив, CBP сохраняет свою хроматин-ремоделирующую (histone acetylase; HAT) активность и в CBP–TDG комплексе. В самом деле, ко-трансфекция TDG ведет к дозо-зависимому увеличению экспрессии GAL репортерного гена, слитого с CBP, указывая тем самым, что TDG стимулирует транскрипционную активность CBP.

Т.к. CBP м. ацетилировать как гистоны, так и негистоновые белки, то авт. задались вопросом, может ли TDG ацетилироваться с помощью CBP. Они установили, что происходит и in vitro и in vivo, и что ацетилирование ведет к высвобождению CBP из комплекса. Хотя ацетилирование не затрагивает способности TDG связываться и разрезать неправильно спаренные ДНК, это защищает TDG от связывания с др. компонентом репарационной machinery, apurinic/apyrimidinc endonuclease APE1. Это указывает на то, что CBP-опосредованное ацетилирование м. вовлекаться в регуляцию репарации ДНК.

Это "the first example of a repair enzyme involved in detection of primary DNA lesions that interacts directly with... CBP/p300 and represents a new class of HAT substrate". Итак, за счет хроматин-модифицирующей активности в местах G/T репарации, CBP–TDG комплекс м. регулировать доступ др. компонентов репарационной кухник ДНК. Наконец, это указывает на то, что мутации в cbp или p300 — которые обнаруживаются в различных опухолях — м. дерегулировать связанную с TDG репарацию ДНК и тем самым вносить вклад в генетическую нестабильность, часто ассоциирующую с опухолями.

Гены, белки и мутации