|
|
||
|---|---|---|
|
В ответ на повреждения ДНК эукариотические клетки активируют checkpoint пути, которые останавливают ход клеточного цикла и индуцируют экспрессию генов, необходимых для репарации ДНК. Эта checkpoint machinery состоит из белков, которые распознают ДНК повреждения и инициируют сигнальный ответ.
У Saccharomyces cerevisiae, два существенных гена, MEC1 и RAD53, формируют основу checkpoint пути. После повреждения ДНК, Rad53 фосфорилируется и активируется с помощью Mec1-зависимого механизма; и это фосфорилирование зависит также от др генов, таких как RAD9, DDC1, MEC3, RAD17 и RAD24.
Sugimoto и др. продуцировали повреждения ДНК в специфическом месте и тестировали, связываются ли checkpoint белки с этой областью. Повреждения вызывали с помощью homothallic switching (HO) эндонуклеазы, которая вызывает сайт-специфичные разрывы двойной нити в локусе mating-type (MAT).
Авт. подтвердили, что фосфорилирование Rad53 а клетках, в которых экспрессия HO управляется с галактоз-индуцибельного GAL10 промотора. Это подтверждает, что Rad53 фосфорилируется в ответ на образование двойных разрывов и что имеется lag-период между этими двумя событиями.
Анализ фосфорилирования Rad53 у мутантов показал, что оно зависит от MEC1, DDC1, MEC3, RAD9, RAD17 и RAD24, а иммунопреципитация показала что белок Ddc1 ассоциирует с областью вблизи локуса MAT locus после экспресси HO. Ассоциация Ddc1 обнаруживает зависимость от Rad24, но не от Mec1 или Rad9.
Какова же функция MEC1? Было установлено, что Mec1 соединяется с областью вблизи сайта расщепления после экспрессии HO, но эта ассоциация не зависит от Ddc1, Rad9 и Rad24.
Итак, предполагается, что Mec1 и Ddc1 рекрутируются независимо к месту разрыва двойной нити ДНК с помощью двух отдельных механизмов, участвующих в распознавании повреждений ДНК. И так как Mec1 действует выше Rad53, то очевидно, что checkpoint путь предопределяется путем трансдукции сигналов. Авт. полагают, что гомологи этих генов найдены и у др. видов, включая и человека. Очевидно, что этот механизм checkpoint контроля законсервирован во всех клетках эукариот.
| |