|
|
||
|---|---|---|
|
Дрожжевые клетки направляются в S фазу с помощью комплекса, который состоит из cyclin-зависимой киназы (известной как Cdc28) и ее циклиновых партнеров (Clb5/Clb6). Во время G1 фазы, этот комплекс ингибируется с помощью Sic1, который гарант, что клетка не вступят в S фазу раньше времени. При G1/S переходе, Sic1 разрушается и Cdc28-Clb больше не блокируется. Предварительным условием для деструкции Sic1 является то, чтоон фосфорилируется (с помощью Cdc28 в комплексе с др. набором циклинов, Cln1/Cln2/ Cln3); это ведет к тому, что Sic1 распознается теперь клеточной протеин-деградирующей machinery благодаря белку, называемому Cdc4. Уже известно, что Sic1 фосфорилируется многократно, прежде чем он будет обнаружен и разрушен.
Tyers и др. вызывали мутации в 9 сайтах Sic1, которые м.б. фосфорилированы с помощью Cln-Cdc28. Затем дабавляли сайты обратно по одному. Они показали, что белок нуждается, по крайней мере в 6 таких сайтах, прежде чем он будет связан Cdc4 или деградирован in vivo. Затем, они идентифицировали консенсус аминокислотных последовательностей, окружающий сайты фосфорилирования, которые м. связываться с Cdc4 с высоким сродством. Циклин E имеет такие последовательности, но ни один из 9 сайтов фосфорилирования у Sic1 не согласуется с консенсусом в точности. Кроме того имеет значение количество. Отдельно каждый из этих сайтов Sic1 соединяется слабо с Cdc4, но вместе они дают сайт с высоким сродством для связывания Cdc4.
Более того, биологически важно, чтобы Sic1 имел столь много сайтов связывания, т.к. Sic1 белок с одиночным высокого сродства сайтом связывания Cdc4 из cyclin E разрушается, приводя преждевременному вступлению в S-фазу и гономной нестабильности.
Итак, по крайней мере 6 сайтов необходимо фосфорилировать прежде чем Sic1 будет разрушен и пороговый уровень активности Cln-Cdc28 будет достигнут. Использование этого таймер-механизма указывает также на то, что переход к S фазе является врожденно подобным переключению, которое зависит от шестого порядка концентрации Cln-Cdc28 в виде высоко нелинейной реакции.
| |