|
|
||
|---|---|---|
|
Как оболочка окружает эндоцитический пузырек, прикрепленный к плазматической мембране? В этом процессе участвует фосфолипид phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate (PtdIns(4,5)P2).
Несколько белков участвует в эндоцитозе, включая , clathrin assembly lymphoid-myeloid leukaemia protein () и его нейрональный гомолог , содержат epsin amino-terminal homology ( ) домен. Itoh и др. не нашли белка, который бы связывался с epsin's ENTH доменом, тогда они исследовали фосфолипидных партнеров и открыли, что PtdIns(4,5)P2-содержащие пузырьки связываюся с ним. NMR спектроскопия epsin's ENTH домена, связанного с inositol-1,4,5-trisphosphate (Ins(1,4,5)P3), выявила, что Ins(1,4,5)P3 соединяется с положительно заряженным карманом в 8-спиральном пучке(eight-helix bundle). Делеция петли 1 или замена Arg63 или Lys76 на Ala в спирали 3 всегда устраняет связывание Ins(1,4,5)P3, а избыточная экспрессия мутантного эпсина с отсутствием ENTH домена, или Lys76Ala мутанта, блокирует эндоцитоз.
Ford и др. используя X-ray кристаллографию, установили N-конца CALM's , связанного с серией inositol phosphates и phosphoinositides. N-конец CALM's выглядит очень похожим на epsin's ENTH домен, но , к удивлению, PtdIns(4,5)P2 соединяется с кластером выступающих лизинов и гистидина, отсутствующих в epsin's ENTH домене. Как CALM , так и AP180 специфически седементировали с помощью липосом или трубочек, содержащих PtdIns(4,5)P2, а мутация лизинового кластера любого из белков блокировала седиментацию. Ford и др. частично восстановили образование клатриновой оболочки, используя PtdIns(4,5)P2-содержащий фосфолипидный монослой, clathrin, AP180 и adaptor protein . Замена PtdIns(4,5)P2 на PtdIns, или удаление AP180, устраняли образование клатринового lattices.
|