Tissue culture methods
(Рис.1.) | Diagram of fibroblasts growing on two-dimensional or three-dimensional substrates.
(Рис.2.) | Morphology of fibroblasts migrating inside a collagen gel.
(Рис.3.) | Epithelial cells sit on ECM but fibroblasts invade.
(Рис.4.) | Diagrammatic summary of experiments on epithelial–ECM interaction.
(Рис.5.) | Diagram showing the effect of matrix molecules on the basal surface of corneal epithelium.
(Рис.6.) | Diagram showing lactation and involution cycle of the mammary gland.
|
ORIGINAL RESEARCH PAPER Baum, B. & Perrimon, N. Spatial control of the actin cytoskeleton in Drosophila epithelial cells. Nature Cell Biol. 3, 883-890 (2001) | Article | WEB SITE Perrimon lab |
Актиновые филаменты вовлечены в процесс цитокинеза, поляризованного внутриклеточного транспорта, адгезию и миграцию. Следовательно, действие F-actin должно регулироваться как во времени, так и пространстве, гаранитируя 'the cap always fits' - др. словами, чтобы подготовить уровень и локализацию актина для соответствующей биологической функции. Идентифифцированы белки, необходимые для полимеризации и деполяризации актина; напр.,Enable (Ena) и VASP, катализирующих образование актина, тогда как adenylyl-cyclase-associated proteins (CAP proteins) ограничивают полимеризацию. Однако, мало известно о функции actin-regulatory белков у интектного организма.
Фолликулярные клетки, окружающие цисту зародышевой линии, и во время оогенеза испытывающие два существенных изменения формы, являются идеальной системой для изучения регуляции динамики актина. Генерируя клоны клеток без Ena, CAP (Drosophila гомолог CAP белка) или (Abl, тирозин киназы, которая действует как CAP-связывающий белок), Baum and Perrimon изучали роль каждого из этих генов в модулировании пространственной организации актинового цитоскелета в этих клетках. Клоны фолликулярных клеток без CAP поддерживают их эпителиальную полярность, но имеют повышенные уровни актина и дефекты в организации актина.(На рис. CAP клоны внутри эпителия фолликулярных клеток, маркированы отсутсвием green fluorescent protein (зеленый цв.), имеют повышенные уровни актина (розовый цв.) и Ena (голубой цв.) в апикальной мембране.) Сходным образом, Abl клоны также имеют слабые дейекты в организации актина. Ena клоны, однако, теряют актиновые филаменты.
У млекопитающих Abl связывает CAP и противодействует функции Ena, поэтому предпринята попытка определить действуют CAP/Abl/Ena вместе, контролируя уровень и локализацию F-actin. Эпистатические эксперименты позволили поместить Ena генетически ниже CAP в регуляции организации актина, т.к. потеря CAP ведет к изменениям в локализации как Ena , так и Abl.
Следовательно, действие актин-регулирующих белков в интактном организме очень сходно с системами, ранее обнаруженными в клетках млекопитающих. CAP, в сотрудничестве с Abl, ингибируют полимеризацию актина, тогда как Ena действует противоположным образом. Этот набор генов вместе гарантирует правильный уровень актина и соответствующую его локализацию.
Организация цитоскелета клеток, которые растут в тканевой культуре, часто отличается от той, что в живых организмах. Поэтому изучали рост клеток в улучшенных двумерных и трехмерных культуральных системах, которые достаточно точно воспроизводят условия внеклеточного матрикса in vivo и д. создавать более аккуратную картину актин-цитоскелетной функции в живых организмах (см. Приложение 1 и рис.1-6).
| ORIGINAL PAPER Deepika Walpita & Elizabeth Hay. Studying actin-dependent processes in tissue culture. Nature Reviews Molecular Cell Biology 3, 137 -141 (2002) |