Protein Dynamics In Living Cells
ЖИВЫЕ КЛЕТКИ: ТЕХНИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Studying protein dynamics in living cells

Jennifer Lippincott-Schwartz, Erik Snapp & Anne Kenworthy
Nature Reviews Molecular Cell Biology 2, 444 -456 (2001)
Использование green fluorescent белка, позволяет определять субклеточную локализацию, подвижность, транспортные пути и связующие взаимодействия белков в живых клетках. Наблюдаение живых клеток, в комбинации с photobleaching, energy transfer или fluorescence correlation spectroscopy проливают свет на движения белков и их взаимодействия с клеточными компонентами.

(Рис.1.)

(Рис.2.)

(Рис.3.)

(Рис.4.)

(Рис.5.)

(Рис.6.)



В обзоре описывается использование техники, базирующейся на биофизической микроскопии в комбинации с GFP-химерами для характеристики динамики белков в живых клетках.
Техника photobleaching FRAP (fluorescence recovery after photobleaching)) используется с середины 1970s для определения диффузионных констант белков, меченных флюоресцентными антителами, в плазматической мембране клеток. Photobleaching GFP-химерные белки локализуются повсюду в клетке, они используются для определения вязкости различных клеточных условий и для выявления диффузионной подвижности различных белков.
Вариации FRAP, включая селективный photobleaching и FLIP (fluorescence loss in photobleaching), м. выявить прерывность и беспрерывность внутриклеточных органелл и компартментов. Кроме того FLIP используется для характеристики кинетики связязывания и высвобождения белка в живых клетках.
FRET (fluorescence resonance energy transfer) является свойством определенных пар fluorophores, в которых флюорофор с высокой энергией м. возбуждать флюорофор с низкой энергией, если оба они оказываются в тесной близи. FRET микроскопия используется для определния могут ли белки, который ко-локализуются, физически взаимодействовать в фиксированных и живых клетках. Описано несколько примеров и вариантов FRET.
Техника FCS (fluorescence correlation spectroscopy) стала доступной для клеточной биологии. FCS м.б. использована для измерения диффузионных констант во множественных популяциях и для определения соотношения связанного и свободного белка, что позволяет коректно измерять межбелковые взаимодействия в клетках
Разрабатываются новые варианты GFP, необычные свойства GFP, альтернативы GFP для живых клеток, и новые микроскопические техники для исследований живых клеток.
Сайт создан в системе uCoz