Neurons: NADPH-diaphorese
НЕЙРОНЫ, ЭКСПРЕССИРУЮЩИУ NADPH-ДИАФОРАЗУ

Окись азота (NO), газ со свободным радикалом, по-видимому, действует как межклеточный мессенджер в ЦНС. Этот предполагаемый нейротрансмиттер отличается тем, что не высвобождается из синаптических пузырьков, а скорее свободно диффундирует. NO действует таким образом на различные внутриклеточные молекулы, такие как guanylyl cyclase, скорее, чем на внеклеточные рецепторы. NO имеет коротый период полужизни (5-10 сек) и труден для изучения. Исследования поэтому фокусируются на nitric oxide syntase (NOS), ферменте образующем NO из аргинина. NOS нуждается в калмодулине, кальции и nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) как кофакторах. NADPH-диафораза продуцирует NADPH, который вызывает восстановление NOS в nitro blue tetrazolium (NBT). Следовательно, эксперссия диафоразы м. расматриваться как маркер присутствия NOS в нейронах ЦНС.	NADPH-диафоразы гистохимия использована для изучения спинного мозга эмбионов человека между 6 и 14 неделей беременности. Уже в 6 недель большинство клеток спинного мозга диафораза-позитивны Симпатические преганглиолярные нейроны Окрашивание на диафоразу выявляет кластеры презумптивных sympathetic preganglionic neurons (SPNs) торако-люмбальной части спинного мозга на всех изученных сроках. Сначала диафораза-позитиыне SPNs диспергированы вдоль латеральных аспектов вентральных рогов, образуя непрерывные группы клеток от вентральных кончиков вентральных рогов в промежуточное серое вещество. В ходе дальнейшего развития интенсивность окрашивания SPNs постоянно усиливатеся, а клетки постепенно транслоцируются дорсально и медиально, формируя плотно упакованные группы аутономных моторных нейронов внутри промежуточного серого вещества (рис.) В отличие от автономных моторных нейронов выявляется также пул соматических моторных диафораза-негативных нейронов. У 6-7-недельных эмбионов SPNs собираются в кластеры. SPNs сначала обнаруживаются в латеральных половинах вентральных рогов с многочисленными нейральными отростками, ориентированными дорсо-вентрально. Дополнительные SPNs с медиолатеральной ориентацией отростков обнаруживаются в промежуточном сером веществе, медиальные днедриты которых собраны в пучки. 1 неделей позже (примерно 8 неделя) ряд диафораза-позитивных SPNs , обнаруживается вдоль дорсо-латерального края вентрального рога. Собранные в пучки отростки этих плотно упакованных нейронов intermediolateral (IML) ядра интенсивно красятся на диафоразу и могут быть прослежены до латеральной маргинальной зоны. Кластеры медио-латерально ориентированных SPNs все еще находятся в промежуточном сером веществе часто их ведущие отростки прослеживаются медиально до вентрикулярной зоны. Кроме того презумптивные SPN кластеры иногда обнаруживаются вентральнее промежуточного серого вещества с косой ориентацией дорсо-вентральной оси. Отростки этих клеток прослеживаются до той же самой области вентрикулярной зоны. Позднее примерно 9-10 неделя обнаруживается значительно меньше дорсо-вентрально ориентированных SPNs в вентральных рогах, но больше их обнаруживается в IML сером веществе, формирующих массивное IML ядро. Тела диафораза-позитивных клеток иногда обнаруживаются в латеральной маргинальной зоне, рядом с вытянутыми латеральными дендритами IML клеток. Кластеры медио-латерально ориентрованных SPNs смешаны с медиально ориентированными пучками дендритов IML нейронов, формирующих intercalated (IC) ядро. В самом позднем исследованном периоде (11-14 неделя) SPNs все еще интесивно красятся на всех уровнях торако-люмбального отдела спинного мозга. Клетки IML более плотно упакованы внутри латерального промежуточного серого вещества (рис.) Как и раньше разветвления дендритов IML клеток проецируются и латерально и медиально. Другие SPNs в IC ядре продолжают проникать в медиально проецирующиеся дендриты IML клеток (рис. ). Эта группа немногочисленных клеток с fusiform телами и медиолатеральной ориентацией. Кроме того SPNs внутри lateral funiculus (LF) становятся более многочисленными. 2-я группа SPNs обнаруживаюется на 12-14 неделе внижней торакальной и верхней поясничной части спинного мозга. Билатераьные кластеры SPNs располагаются рядом с центральным каналом, латеральнее обычных центральных автономных (СА) нейронов у грызунов. Клетки вентрального рога и окружающие центральный канал Многочисленные диафораза-позитивные нейроны разбросаны в вентральных рогах в течение 6-14 недели. Эти интернейроны более многочислены в медио-дорсальном аспекте вентрального рога и по-видимому, не включены в пулы соматических моторных нейронов . Интернейроны отличаются по морфологи и интенсивности окрашивания ( интесивно окрашеные мультиполярные клетки). На 7 неделе беременности в шейноми торакальном отделе спинного мозга выявляютя другие диафораз-позитивные нейроны окружающие вентральную часть вентрикулярной зоны. Это биполярные клетки, располагающиеся на границе вентрикуляной и вентральной промежуточной зоны. Они имеют длинные отростки, идущие параллельно вентрикулярной зоне и напоминают ранее описанную U-образную группу клеток. На 8 неделе эти нейроны занимают более дорсальное положение и обнаруживаются и в люмбарном отделе. И позднее эти группы клеток продолжают обнаруживаться но в меньшем количестве. Между 11 и 14 неделей обнаруживаются лишь единичные бипoлярные клетки с дорсо-вентрально ориентированными отростками, напоминающие клетки U-образой группы. В этот период центральный канал характеризуется сильно окрашивающимися клетками. Клетки дорсальных рогов В дорсальных рoгах диафораза позитивные клетки обнаруживаюся с 8-9 недели по вcему спинному мозгу (рис. 7а) Клетки с двумя или более длинными ветвящимися случайно ориентированными отростками и биполярные с дорсо-вентрально ориентировнными отростками. Вторичные дендритные веточkи имеют варикозные расширения. С 10 недели ограничиваются глубокими частями дорсальных рогов. На 12-14 неделе большинство клеток лубоких дорсальных рогов мультиполярно с длинными ветвящимися отростками Примерно 94% autonomic motor neurons (AMNs) диафораза-позитивны у взрослого человека. В процессе развития у модельных животных AMNs мигрируют из вентрикулярной зоны с соматическими моторными нейронами и образуют первичные моторные столбы в вентральных рогах. Затем AMNs мигрируют дорсально и образуют IML ядро в лдатеральном роге, а в ходе дальнейшего развития некоторые из них мигрируют в IC и СА области. Cходная картина у человека. Обнаруживается отличие от грызунов в одном аспекте. Помимо AMNs миграторных путей в спинном мозге человека обнаруживаются кластеры диафораза-позитивных клеток, очень напоминающих SPNs, вентраьно с косой ориентацией дорсо-вентральных отростков. Они присутствуют только в период дорсальной миграции и могут представлять добавочный дорсо-медиальный путь миграции SPNs. Экспрессия диафоразы в раннем развитии и в частности во время миграции нейронов к их финальной позиции указывает на то, что NO м. играть существенную роль в нейрональном развитии.

NADPH-диафоразы гистохимия использована для изучения спинного мозга эмбионов человека между 6 и 14 неделей беременности. Уже в 6 недель большинство клеток спинного мозга диафораза-позитивны

Симпатические преганглиолярные нейроны

Окрашивание на диафоразу выявляет кластеры презумптивных sympathetic preganglionic neurons (SPNs) торако-люмбальной части спинного мозга на всех изученных сроках. Сначала диафораза-позитиыне SPNs диспергированы вдоль латеральных аспектов вентральных рогов, образуя непрерывные группы клеток от вентральных кончиков вентральных рогов в промежуточное серое вещество. В ходе дальнейшего развития интенсивность окрашивания SPNs постоянно усиливатеся, а клетки постепенно транслоцируются дорсально и медиально, формируя плотно упакованные группы аутономных моторных нейронов внутри промежуточного серого вещества (рис.) В отличие от автономных моторных нейронов выявляется также пул соматических моторных диафораза-негативных нейронов.

У 6-7-недельных эмбионов SPNs собираются в кластеры. SPNs сначала обнаруживаются в латеральных половинах вентральных рогов с многочисленными нейральными отростками, ориентированными дорсо-вентрально. Дополнительные SPNs с медиолатеральной ориентацией отростков обнаруживаются в промежуточном сером веществе, медиальные днедриты которых собраны в пучки.

1 неделей позже (примерно 8 неделя) ряд диафораза-позитивных SPNs , обнаруживается вдоль дорсо-латерального края вентрального рога. Собранные в пучки отростки этих плотно упакованных нейронов intermediolateral (IML) ядра интенсивно красятся на диафоразу и могут быть прослежены до латеральной маргинальной зоны. Кластеры медио-латерально ориентированных SPNs все еще находятся в промежуточном сером веществе часто их ведущие отростки прослеживаются медиально до вентрикулярной зоны. Кроме того презумптивные SPN кластеры иногда обнаруживаются вентральнее промежуточного серого вещества с косой ориентацией дорсо-вентральной оси. Отростки этих клеток прослеживаются до той же самой области вентрикулярной зоны.

Позднее примерно 9-10 неделя обнаруживается значительно меньше дорсо-вентрально ориентированных SPNs в вентральных рогах, но больше их обнаруживается в IML сером веществе, формирующих массивное IML ядро. Тела диафораза-позитивных клеток иногда обнаруживаются в латеральной маргинальной зоне, рядом с вытянутыми латеральными дендритами IML клеток. Кластеры медио-латерально ориентрованных SPNs смешаны с медиально ориентированными пучками дендритов IML нейронов, формирующих intercalated (IC) ядро.

В самом позднем исследованном периоде (11-14 неделя) SPNs все еще интесивно красятся на всех уровнях торако-люмбального отдела спинного мозга. Клетки IML более плотно упакованы внутри латерального промежуточного серого вещества (рис.) Как и раньше разветвления дендритов IML клеток проецируются и латерально и медиально. Другие SPNs в IC ядре продолжают проникать в медиально проецирующиеся дендриты IML клеток (рис. ). Эта группа немногочисленных клеток с fusiform телами и медиолатеральной ориентацией. Кроме того SPNs внутри lateral funiculus (LF) становятся более многочисленными. 2-я группа SPNs обнаруживаюется на 12-14 неделе внижней торакальной и верхней поясничной части спинного мозга. Билатераьные кластеры SPNs располагаются рядом с центральным каналом, латеральнее обычных центральных автономных (СА) нейронов у грызунов.

Клетки вентрального рога и окружающие центральный канал

Многочисленные диафораза-позитивные нейроны разбросаны в вентральных рогах в течение 6-14 недели. Эти интернейроны более многочислены в медио-дорсальном аспекте вентрального рога и по-видимому, не включены в пулы соматических моторных нейронов . Интернейроны отличаются по морфологи и интенсивности окрашивания ( интесивно окрашеные мультиполярные клетки).

На 7 неделе беременности в шейноми торакальном отделе спинного мозга выявляютя другие диафораз-позитивные нейроны окружающие вентральную часть вентрикулярной зоны. Это биполярные клетки, располагающиеся на границе вентрикуляной и вентральной промежуточной зоны. Они имеют длинные отростки, идущие параллельно вентрикулярной зоне и напоминают ранее описанную U-образную группу клеток. На 8 неделе эти нейроны занимают более дорсальное положение и обнаруживаются и в люмбарном отделе. И позднее эти группы клеток продолжают обнаруживаться но в меньшем количестве. Между 11 и 14 неделей обнаруживаются лишь единичные бипoлярные клетки с дорсо-вентрально ориентированными отростками, напоминающие клетки U-образой группы. В этот период центральный канал характеризуется сильно окрашивающимися клетками.

Клетки дорсальных рогов

В дорсальных рoгах диафораза позитивные клетки обнаруживаюся с 8-9 недели по вcему спинному мозгу (рис. 7а) Клетки с двумя или более длинными ветвящимися случайно ориентированными отростками и биполярные с дорсо-вентрально ориентировнными отростками. Вторичные дендритные веточkи имеют варикозные расширения. С 10 недели ограничиваются глубокими частями дорсальных рогов. На 12-14 неделе большинство клеток лубоких дорсальных рогов мультиполярно с длинными ветвящимися отростками

Примерно 94% autonomic motor neurons (AMNs) диафораза-позитивны у взрослого человека. В процессе развития у модельных животных AMNs мигрируют из вентрикулярной зоны с соматическими моторными нейронами и образуют первичные моторные столбы в вентральных рогах. Затем AMNs мигрируют дорсально и образуют IML ядро в лдатеральном роге, а в ходе дальнейшего развития некоторые из них мигрируют в IC и СА области. Cходная картина у человека. Обнаруживается отличие от грызунов в одном аспекте. Помимо AMNs миграторных путей в спинном мозге человека обнаруживаются кластеры диафораза-позитивных клеток, очень напоминающих SPNs, вентраьно с косой ориентацией дорсо-вентральных отростков. Они присутствуют только в период дорсальной миграции и могут представлять добавочный дорсо-медиальный путь миграции SPNs.

Экспрессия диафоразы в раннем развитии и в частности во время миграции нейронов к их финальной позиции указывает на то, что NO м. играть существенную роль в нейрональном развитии.