Иммортализация хондроцитов делает возможным долговременное культивирование их in vitro; однако, хондрогенная способность трансформированных клеток варьирует, подчеркивая тем самым необходимость создания пролиферирующих и легко настраиваемых клеточной хондроцитов, в которой возможно контролировать гипертрофическую дифференцировку. В данном исследовании SV40 крупный T антиген и человеческая telomerase reverse transcriptase были использованы для иммортализации объединенных хондроцитов лошади посредством лентивирусного вектора, обеспечивающего трансдукцию или в отдельности, или в комбинации. Трансформированные хондроциты пролиферируют стабильно в течение множественных пассажей, но в результате возникает достоверно более низкая экспрессия специфичной для хондроцитов мРНК collagen II (P<0.0001) и активация гипертрофического маркера collagen X (P<0.0001) в трехмерных культурах. Промотор Col2a1, управляющий GFP репортером, был сконструирован для мониторинга в реальном времени хондрогенной дифференцировки и существенного увеличения активации промотора, наблюдаемых в культурах, обработанных фактором роста TGFβ-3 (P<0.05). Чтобы воспроизвести нативный фенотип суставного хряща мы далее трансдуцировали крупный T антиген иммортализованных хондроцитов с помощью лентивирусных векторов, позволяющих или постоянную, или doxycycline индуцируемую экспрессию Sox9. В 3D культурах, избыточная экспрессия Sox9 в хондроцитах секретирует достоверно более высокие уровни внеклеточного матричного полисахарида glycosaminoglycan (P<0.05), тогда как активация мРНК collagen II и Aggrecan (P<0.05) в обеих системах экспрессии наблюдается в виде сходных паттернов иммуногистохимического окрашивания. Высокие уровни мРНК и белка collagen X поддерживаются при постоянной sox9 отражающей гипертрофической дифференцировке, но достигается достоверно более низкая экспрессия с индуцибельным Sox9. Итак, иммортализация хондроцитов лошади приводит к стабильной пролиферации, но снижение хондрогенного потенциала нуждается в модуляции экспрессии sox9, позволяющей контролировать гипертрофические характеристики хряща. J. Cell. Biochem. 118: 1201-1215, 2017. © 2016 Wiley Periodicals, Inc.