Посещений:
Hedgehog Pathway (Drosophila)
Компоненты Пути Hedgehog
In keeping with its namesake, Hedgehog (Hh) — or, at least, components of the Hh pathway — has come out of hibernation. Thanks to work by Phil Beachy and colleagues, reported in Science, Dally-like protein (Dlp) and casein kinase 1α (CK1a) have newly assigned roles in Hh signalling.
Lum, L. et al. Identification of Hedgehog pathway components by RNAi in Drosophila cultured cells. Science 299, 2039-2045 (2003) | Article |  PubMed |  ChemPort

Авт. использовали RNA interference (RNAi) в культивируемых клетках Drosophila. Они трансфицировали клетки, происходящие из крылового имагинального диска (cl-8 клеток), с чувствительным к Hh пути luciferase репортером и double-stranded RNA (dsRNA) для RNAi. Использование ими экзогенного Hh лиганда исключало компоненты, которые участвуют в синтезе или распределеении Hh, и что делало метод количественным.Также, т.к. были использованы разные виды dsRNA, то м-д м.б.использован для изучения взаимодействий и эпистаза генов.
Чтобы протестировать систему авт. использовали библиотеку, содержащую все dsRNAs киназ и фосфатаз из геномных последовательностей Drosophila. Некоторые из пулдов dsRNA, которые влияли на активность репортера, были идентифицированы и когда были повторно скринированы, то были выявлены три dsRNAs. Из них, casein kinase 1α (CK1α) ранее не была замечена в участии в передаче сигналов Hh.
Расширенный скрининг в библиотеке dsRNA базировался на Drosophila Gene Collection Release 1 — которая содержала кДНК, соответствующие ~43% генов Drosophila — идентифицированы 4 гена-мишени, которые которые ранее не были известны как участники передачи сигналов Hh signalling. CK1α была одной из них; др. был Dlp, glycipan heparin sulphate proteoglycan. Оба, как полагают, функционируют на пути передачи сигналов Wingless (Wg).
Иммуноокрашивание показало, что Dlp локализуется на поверхности cl-8 клеток. RNAi of Ptc, супрессирующая потребность в Dlp в Hh реакции, указывает на то, что Dlp м. функционировать выше или на уровне Ptc. Т.к. Ptc является мембранным белком, то Dlp м. помогать передавать Hh на Ptc, концентрируя тем самым Hh на клеточной поверхности и в самом деле, предварительные доказательства указывают на то, что Dlp ассоциирует с Hh. В соответствии с этой ролью, когда Hh экспрессируется в мембран-закрепленной форме, то RNAi of Dlp не блокирует высвобождения сигналов, это указывает на то, что Dlp м. функционировать, обычно концентрируя Hh сигнал.
Получены указания, что CK1α м. контролировать активность основного пути, т.к. dsRNA увеличивает базовую активность репортера. Ci необходим для этого увеличения, тогда как Smo и Fu нет, это указывает на то, что CK1α является вышестоящим или на уровне Ci, но стоит ниже Smo и Fu.
Т.к. регулятор базовой активности Hh — и Wg — сигналов, CK1a м. функционировать как опухолевый супрессор в ряде опухолей, которые ассоциированы с избыточной продукцией одного или несмкольких др. путей. Сходным образом, делеция хромосомной области человека, которая содержит GPC6, glycipan член у млекопитающих, который тесно с вязан с Dlp, ассоциирует со многими уродствами у человека. Необходимо выявить мутации по одному из двух оставшихся генов, идентифицированных при скрининге, которые ранее не были отмечены участием в предаче сигналов Hh. Авт. надеются, что выявление функции этих генов в пути Hh окажется не очень сложной проблемой!
Сайт создан в системе uCoz