У позвоночных mid–hindbrain boundary (MHB) является важным центром, организующим сигналы для формироания паттерна среднего мозга и ростральной части заднего мозга.Известно, что MHB образуется там, где проходит каудальная граница экспрессии гена Otx2 и где она встречается с ростральной границей экспрессии гена Gbx2.

Известно, что инактивация или Otx2 или Gbx2 не препятствует образованию MHB границы, но меняет ее положение. Так, потеря Otx2 сдвигает MHB рострально, тогда как потеря Gbx2 сдвигает ее каудально. В любом случае, имеется соответствующий сдвиг в положении домена экспрессии Fgf8, так что его ростальная граница приходится на MHB. Следовательно, ни Otx2, ни Gbx2 не нужны для активации Fgf8. Однако, каждый из этих генов в отдельности существенен.

Martinez-Barbera et al. и Li and Joyner исследовали эффекты одновременной инактивации и Otx2, и Gbx2 у мышей. Они показали, что экспрессия Fgf8 не зависит от функции Otx2 и Gbx2, т.к. ген все равно активировался у двойных мутантов, хотя домен его экспрессии был шире, распространялся на всю переднюю часть нейральной пластинки.

Если Fgf8 все еще м. экспрессироваться в отсутствие и Otx2 и Gbx2, то какие же факторы отвечают за его инициальную активацию? Ye et al. на эмбрионах кур показали, что ген Pax2 м. активировать Fgf8, после того как сформирована MHB, следовательно, Otx2 и Gbx2 необходимы для поддержания и укрепления домена его экспрессии.

Итак, индукция и позиционирование MHB, по-видимому, зависят от интеграции разных молекулярных механизмов. Pax2 существенен для активации MHB-специфических генов, таких как Fgf8, а Otx2 и Gbx2 необходимы для предопределения финалной позиции доменов их экспрессии.