Exit from exit: resetting the cell cycle through Amn1 inhibition of G protein signaling.
Wang, Y. et al. Cell112, 697-709 (2003) |
FURTHER READING Bardin, A. J. & Amon, A. MEN and SIN: what's the difference? Nature Rev. Mol. Cell Biol.2, 815-826 (2001) | |
Выход из митоза характеризуется низкой активностью киназы и активацией фосфатазы . Эта финальная стадия клеточного цикла запускается с помощью , GTPase, располагающейся в полярных тельцах веретена, которая после вступления в дочернюю клетку активируется и передает сигнал mitotic exit network (MEN) пути. Однако, клетки д.б. способны обращать состояние митотического выхода и вступать в следующий клеточный цикл. reverse the state of mitotic exit to enter the next cell cycle.
Elledge и др. идентифицировали 'antagonist of MEN' () в результате генетического скрининга и и предприняли попытку установить, является ли Amn1 bona fide негативным регулятором MEN. Они нашли, что избыточная экспрессиия Amn1 является токсичной для MEN мутантных линий и клеток дикого типа, в которые задержаны или арестованы во время митотического выхода. Amn1 необходим также для ядерной ориентации и spindle checkpoints, это указывает на то, что AMN1 является checkpoint геном и м. функционировать скоординировано с др. checkpoints в контроле выхода из митоза.
Затем было установлено, что экспрессия AMN1 регули руется клеточным циклом и достигает пика в поздней М и G1 фазе. Более того, внутриклеточная локализация с помощью green fluorescent protein (GFP)-меченной AMN1 линии, показала, что высокий уровень экспрессии специфичен для дочерних клеток. Транскрипционные факторы, ответственные за транскрипцию AMN1, и , выключаются в зависимости от активации с помощью MEN. Итак, транскрипция AMN1 индуцируется специфически в дочерних клетках после выхода из митоза.
Чтобы определить мишень Amn1-обуслоленного ингибирования MEN, группа Elledgeпровела др. генетический скрининг и выделеила TEM1. Amn1 связывается непосредственно с Tem1, и in vitro и in vivo, указывая тем самым, что Amn1 м. ингибировать MEN благодаря своей способности связывать и ингибировать функцию Tem1. Связывание Tem1 с его мишенью kinase является существенным для активации MEN и авт. наблюдали, что отстутствие Amn1 способствует ассоциации Tem1–Cdc15. Напротив, избыточная продукция Amn1 снижает ассоциацию Tem1–Cdc15, указывая тем самым, что Cdc15 и Amn1 конкурируют за ассоциацию с Tem1. Когда AMN1 избыточно экспрессируется в клетках, арестованных во время выхода из митоза, то уровни Tem1–Cdc15 ассоциации также редуцированы, это говорит о том, что Amn1 м. разбирать уже сформированные Tem1–Cdc15 комплексы, выключая тем самым MEN.
Получены доказательства, что SCF, E3 ubiquitin ligase, м.б. ответственен за деградацию Amn1. Более того, возможно, что фосфорилирование Cdk1 направляет Amn1 на деградацию, это м. объяснить его быструю деградацию, когда клетки вступают в S фазу.