Live-cell monitoring of tyrosine phosphorylation in focal adhesions following microtubule disruption Jochen Kirchner, Zvi Kam, Gila Tzur, Alexander D. Bershadsky, and Benjamin Geiger JCS 2003 116: 975-986.
Рис.5. | (A) Domain structure of pp60Src and amino acid sequence of the SH2 domain (from mouse neuronal Src). (B) Schematic representation of the YFP-SH2 and YFP-dSH2 constructs. (C) Live-cell recording of SV80 cells transfected with YFP-SH2. The fusion protein localizes to FAs only weakly and shows a high cytoplasmic background. (D) Live-cell recording of SV80 cells transfected with YFP-dSH2.
Focal adhesions (FAs) являются мультибелковыми комплексами, которые связывают интегрины, прикрепленные ко внеклеточному матриксу с актиновым цитоскелетом. Сборка и поддержание этих комплексов регулируется с помощью Rho семейства GTPases. Фосфорилирование тирозинов FA белков, таких как paxillin и focal adhesion kinase (FAK) такж, по-вилдимому, принимает в этом участие. Это обеспечивает docking места для др. белков (напр., Src), но его роль в регуляции сборки/обмена FA неясна. Benjamin Geiger и др. разработали новый подход для изучения FA-phosphorylation (YFP-dSH2) для динамичного мониторинга фосфорилирования тирозинов в FAs живых клеток (см. ). Авт. наблюдали после стимуляции клеток SV80 с помощью лекарства, деполяризующего микротрубочки, nocodazole быстрое рекрутирование vinculin, paxillin и FA kinase (FAK) в растущие FAs. Phosphotyrosine остатки однако появлялись только спустя несколько мин. Это указывает на то, что фосфорилирование тирозина врядли управляет образованием фокальных адгехзий, а является скорее вторичным событием, участвующим в обороте или передече сигналов FA.
