Cao, K. et al. The AAA-ATPase Cdc48/p97 regulates spindle disassembly at the end of mitosis. Cell115, 355-367 (2003) | | |
How spindles assemble has attracted a lot of attention. However, little is known about the mechanism of spindle disassembly, which takes places at the end of mitosis. Now though, reporting in Cell, Yixian Zheng and colleagues have identified the AAA-ATPase / and the – adaptor complex as important regulators of this process.
Учитывая их роль в диссоциации белков от больших клеточных структур, таких как эндоплазматический ретикулюм, авт. тестировали, может ли комплекс Cdc48/p97–Ufd1–Npl4 в разборке веретена. Они нашли, что в экстрактах яиц Xenopus laevis доминантно-негативная форма Xenopus p97 (p97QQ), которая дефектна в отношениии гидролиза АТФ, блокирует разборку веретена и образование интерфазных ядер и наборов микротрубочек. И Ufd1–Npl4 адапторный комплекс также необходим для разборки веретена.
Zheng и др. нашли, что белки, связывающие микротрубочки, и и ассооциированная с веретеном Polo-like kinase , ко-иммунопреципитируются с p97–Ufd1–Npl4 из экстрактов, индуцированных к выходу из митозов. Кроме того, по сравнению с p97 wild-type обработкой, обработка p97QQ обусловливает усиление связывания и XMAP215 и TPX2 с микротрубочками после выхода из митоза. Итак, p97–Ufd1–Npl4, по-видимому, регулирует связываение определенных факторов сборки веретена с микротрубочками при выходе из митоза.
Для изучения функции p97 in vivo, авт. использовали дрожжевой гомолог, Cdc48, и нашли, что — при рестриктивной температуре — клетки чувствительной к теплу мутантной линии (cdc48-3) задерживались в митозе и веретено сначала удлиннялось, а щатем спадалось до веретена средней длины, которое и сохранялось. Чувствиетельный к температуре мутант Npl4 также обнаруживает дефекты по разборке веретена, поэтому авт. пришли к выводу, что Cdc48–Ufd1–Npl4 регулирует разборку веретена у дрожжей in vivo.
Инактивация киназы в конце митоза также играет роль в регуляции разборки веретена. Однако Cdc48/p97 не является необходимым для инактивации Cdc2 ни в яйцевых экстрактах Xenopus , ни у дрожжей.
Каков же механизм разборки веретена с участием Cdc48? Zheng и др. предполагают, что Cdc48 м. регулировать разборку веретена путем связывания (дрожжевой гомолог Plx1), a Cdc5 и Ase1 необходимы для его деградации после выхода из митоза.
Авт. приходят к заключению, что в конце митоза и инактивация Cdc2 и активность Cdc48/p97–Ufd1–Npl4 необходимы для разборки веретена. Они считают, что этот комплекс связывает определенные факторы сборки веретена и препятсвует их участию в сборке веретена.