активность β-галактозидазы выявляется в SA узле, AV соединении и ветвях пучка и ко-локализуется с маркёром проводящей системы Сх40 с субэндокарде межжелудочковой перегородки (Kupershmidt et al., 1999). Экспрессия
сходна с таковой в линии, описанной в нашей лаборатории, cardiac conduction system (CSS)-lacZ (Myers, Fishman, 2003). В этой линии случайная инсерция
промоторных элементов во время экспрессии репортерного гена приводит к существенному мечению CPCS в течение всего развития сердца и у взрослых (Rentchler et al., 2001). Уникальным аспектом CCS-lacZ окрашивания является видимость сети волокон Пуркинье во время эмбриогенеза. Паттерн взрослой экспрессии, однако, не был описан и не был сравнен с информативным мечением вентрикулярной проводящей системы за счёт GFP, экспрессируемого под контролем гена Сх40 (Miquerol et al., 2004).
Позднее в эмбриогенезе и во взрослом сердце экспрессия Сх40, как показано с помощью иммуногистохимии, специфически централный AV узел и ткань вентрикулярной проводящей системы (Delorme et al., 1995; Coppen et al., 2003). На срезах взрослых CCS-lacZ сердец мы ко-локализовали Сх40 иммуноокрашивание с экспрессией трансгена в узле, пучке Гиса, ветвях пучка и субэндокардиальных волокнах Пуркинье вдоль межжелудочковой перегородки. Паттерн экспрессии, детализированный с помощью иммуноокрашивания Сх40 был воспроизведен в линии Сх40-GFP линии (Miquerol et al., 2004). В Сх40-GFP сердцах полная сеть волокон Пуркинье видна очень хорошо (Miquwrol et al., 2004). Целое X-gal окрашивание взрослых CCS-lacZ сердец также показывало экспрессию трансгена в виде обширной сети волокон, как и в случае Сх40-GFP (Рис. 2).
Cardial Conduction System Induction
Мы использовали CCS-lacZ линию для изучения факторов, которые м. влиять на развитие CPCS. В сердцах птиц выявлена роль endothelin в управлении образованием периартериальных волокон Пуркинье (Gourdie et al., 1998; Takebayashi-Suzuki et al., 2000; Hall et al., 2004). Мы тестировали способность endothelin (ET) и др. факторов, таких как neuregulin (NRG), angiotensin II и insulin-like growth factor I влиять на паттерн экспрессии CPCS в культивируемых эмбриональных сердцах (Rentschler et al., 2002). Лишь neuregulin вызывал существенное усиление экспрессии lacZ, а также соотв. изменения последовтельность функциональной активации.
Эта находка вызвала много вопросов о действии in vivo neuregulin и endothelin в развитии вентрикулярной проводящей системы мышей. Использование мутаций NRG ограничено, т.к. эти мыши погибают очень рано в эмбриогенезе с обширными дефектами сердца (Lee et al., 1995; Meyer, Birchmeier, 1995; Garratt et al., 2003). Условные делеции NRG рецептора ErbB2 ведут к дилятационной кардиомиопатии, но не влияют на функцию CPCS (Ozcelick et al., 2002). Т.к. имеется перекрывание ErbB рецепторов, то это не исключает вовлечение NRG в развитие вентрикулярной проводящей системы. перекрывание составляет проблему и при изучении функции передачи сигналов endothelin. Нокаут одиночного лиганда дает в результате кардиальные черепно-лицевые аномалии, указывая на роль эндотелина в нервном гребне. Попытки элиминировать передачу сигналов путём разрушения endothelin-converting энзимов, необходимого для создания активного endothelin, всё ещё не полностью блокирует продукцию зрелого ET (Yanagisawa et al., 2000). Вопрос об влиянии эндотелина на CPCS не решен, пока не будут получены двойные мутанты, нарушающие оба рецептора А и В в сердце Kedzierski et al., 2003).
Сайт создан в системе
uCoz
