Mishima, M. et al. Cell cycle regulation of central spindle assembly. Nature 430, 908–913 (2004) | | | | | | |
 | | Микротрубочковая центральная часть веретена является молекулярной сборкой, которая участвует в регуляции цитокинеза. А centralspindlin комплекс - который состоит из кинезин-подобного белка ZEN-4 и Rho-family GTPase-активируемого белка CYK-4 у Caenorhabditis elegans (и их ортологов и MgcRacGAP в клетках млекопитающих) - образует пучки индивидуальных микротрубочек и т.обр., существеннен для сборки этой машины в анафазе. Но как регулируются временные параметры этой сборки?
Mishima et al. начали раскручивать эту проблему путём идентификации механизма, который регулирует активность centralspindlin и, следовательно, сборку центральной части веретена. Они показали, используя in vitro подход, что N-терминальные моторные домены ZEN-4 (ZEN-4MOT) и MKLP1 фосфорилируются с помощью cyclin-B- комплекса, который является активным во время метафазы и оказывается инактивированным во время перехода metaphase-anaphase. Делеция N-терминального базового расширения, которое содержит один из cyclin-B-CDK1 сайтов фосфорилирования ZEN-4MOT, также редуцирует его ATPase активность и его способность вызывать перемещения микротрубочек - двух витальных функций кинезина. Фосфорилирование законсервированного остатка треонина в изолированном ZEN-4MOT редуцирует ATPase и microtubule-mobility функции домена, это указывает но то, что этот белок м. контролироваться с помощью phosphoregulation. В согласии с этим, когда мутантная, неспособная к фосфорилированию форма MKLP1 (MKLP1-AA) экспрессируется в культивируемых клетках млекопитающих, то белок локализуется несоответственно по отношению к веретену и геномный материал не способен собственно сегрегировать. Более того, путём использования phospho-threonine-proline антител и сравнения событий расхождения хромосом в нормальных и MKLP1-AA-экспрессирующих клетках, Mishima et al. показали, что MKLP1 фосфорилируется во время метафазы - это предупреждает его ассоциацию с веретеном - и дефосфорилируется во время метафазы, когда он становится локализованным в центральной части веретена.
Наконец, CDC14 фосфатаза, как было показано, дефосфорилирует и MKLP1 и ZEN-4 in vitro. А у C. elegans, истощение CDC-14 предупреждает локализацию меченной формы ZEN-4, но не делает этого у неспособной к фосфорилированию формы ZEN-4, на центральной части веретена в анафазе. Итак, очевидно, что активности клеточного цикла киназы и фосфатазы контролирует временные параметры образования центральной части веретена и, следовательно, клеточное деление.
|