Calmodulin-подобные centrin белки достаточно хорошо охарактеризованы в отношении их роли в удвоении microtubule organizing centres (MTOCs). Fischer et al. показали, что дрожжевой centrin Cdc31, по-видимому, многофункционален, т.к. неожидано выявлена его роль и в экспорте ядерной мРНК machinery.

CID | MTOCs | SPB

A model of the changes in PTC-containing mRNA-protein complexes (mRNPs) during nuclear export.

Недавно идентифицированные компоненты дрожжевой mRNA-export machinery (кухни) - Sac3, Thp1 и Sus1 - формируют комплекс, который м. соединять процессы транскрипции и экспорта мРНК. Sac3 взаимодействует с компонентами ядерных пор, а Thp1 и Sus1 участвуют в транскрипции.

C-терминальный 'C домен' Sac3 токсичен, если избыточно экспрессируется и вызывает сильные нарушения экспорта мРНК. Fischer et al. анализировали делеционных мутантов в этой области и установили, что область представленная остатками 733-851, важны как для токсичности, так и для локализации на периферии ядра. Однако, избыточная экспрессия только Sac3^733-860 хотя и всё ещё токсична, но не влияет на экспорт мРНК.

Токсичность фрагментов C-доменов м.б. обусловлена тем фактом, что они связываются и , следовательно, секвестрируются на существенном белке. Итак, фрагменты были мечены и affinity очищены для идентификации потенциальных партнёров по связыванию. Два белка, Cdc31 и Sus1, очищались вместе с токсическими фрагментами С-домена. А в Sus1-негативной линии дрожжей Sac3^733-860 фрагмент оставался токсичным и всё ещё был способен рекрутировать Cdc31. Этот сегмент в 130-остатков был назван Cdc31-interacting domain (CID).

Избыточная экспрессия Sac3^CID в синхронизированных клетках вызывала арест клеточного цикла и продуцировала большие почкующиеся клетки с одиночным spindle pole body (SPB; у дрожжей эквивалент MTOC). Этот эффект м.б. сильно редуцирован с помощью ко-экспрессии Cdc31. Итак, Sac3^CID вмешивается в удвоение SPB путём титрации Cdc31.

Затем было подтверждено, что Cdc31 является истинным компонентом комплекса Sac3-Thp1-Sus1. Они применили 'split double tag method', который использовался в линии дрожжей с хромосомно интегрированными версиями Sus1 и Thp1, каждый из которых имеет собственную молекулярную метку. Элюированный после ступени affinity-очистки для мечения Sus1 был затем подвергнут affinity очистке в отношении альтернативно меченного Thp1 белка. Эта схема очистки эффективно выделяла компоненты комплекса Sac3-Thp1-Sus1, а также Cdc31. Более того, меченный Cdc31 соотв. очищался вместе с др. членами этого комплекса, а также с SPB компонентом Sfi1.

Получено подтверждение, что Cdc31 участвует как в SPBs так и в ядерной оболочке, в самом деле, флюоресцентно меченный Cdc31 метил обе структуры. Различные ts аллели Cdc31, которые были изучены, вызывали дефекты в функции SPB, а один вызывал накопление poly(A) РНК внутри ядра.

Наконец, делеция мотива CID вызывала дефекты в экспорте мРНК и неспособность Sac3ΔCID, Sus1 и Thp1 ассоциировать с ядерной оболочкой. Ни один Sac3ΔCID оказался не в состоянии рекрутировать Cdc31 или Sus1. Следовательно, мотив CID необходим для рекрутирования как Cdc31 так и Sus1 на Sac3-Thp1 гетеродимер, и комплекса Sac3-Thp1-Sus1 на периферию ядра.

Эта новая роль Cdc31 в связанном с транскрипцией экспорте мРНК согласуется со всё увеличивающимися доказательствами дополнительных ролей у др. centrins. Авт. подчёркивают "...not uncommon that proteins with an important role in distinct cellular pathways are physically linked to the nuclear pore complex", т.к. это м. предоставлять способ для главных клеточных путей влиять др. на др.