Посещений:
Образование Филоподий

Роль c-Abl и Dok1


Woodring, P. et al. c-Abl phosphorylates Dok1 to promote filopodia during cell spreading. J. Cell Biol. 165, 493–503 (2004) | Article |  PubMed |  ISI |  ChemPort

FURTHER READING
Hernandez, S. et al. How do Abl family kinases regulates cell shape and movement? Trends Cell Biol. 14, 36–44 (2004) | Article |  PubMed |  ISI |  ChemPort



Рис.1.  | A cultured sensory neuron extending a growth cone with long thin filopodia

When placed in a new environment, a cell will extend long actin-rich structures called filopodia to help explore its surroundings, especially whilst it's spreading. The tyrosine kinase Abl promotes these finger-like filopodia, and Woodring et al. now suggest that this is achieved by Abl signalling to actin at the cell periphery through the phosphorylation of Dok1, which then recruits the adaptor protein Nck

Образование филоподий зависит от активности Abl, так что началась охота за субстратом Abl. Используя Src-homology-2 (SH2) домен Abl в качестве матричного сродства в лизатах от распластывающихся (spreading) фибробластов, авт. выявили группу phosphotyrosine-содержащих белков в ранге более 60-kDa. Белок в 62-kDa Dok1 является фосфорилированным по тирозину в Abl-трансформированных клетках, авт. проверяли, м. ли быть Dok1 одним из белков этой группы. Серия экспериментов подтвердила, что Dok1 и в самом деле является субстратом для Abl во время spreading.
Как Abl влияет на Dok1? Использована серия мутаций, в которых остатки тирозина мутировали в не-фосфорилируемый фенилаланин. Мутанты экспрессировались в spreading эмбриональных фибробластах мышей, которые были нулевыми как по Abl так и Arg (родственно протеин киназе) или в тех же самых клетках были reconstituted с Abl. Все конструкции помимо Y361F Dok1 имели высокие уровни фосфорилирования тирозина в последнем типе клеток, указывая тем самым, что Abl-обусловленное фосфорилирование Dok1 Y361 происходит во время spreading клеток, этот результат был подтвержден с помощью in vitro биохимического assays.
После обнаружения позитивной корреляции между активностью Abl количеством актиновых microspikes (предшественников филоподий) и количеством фосфорилированного по тирозину Dok1, Woodring et al. изучали, м. ли Dok1 увеличивать количество филоподий, индуцируемых Abl в spreading фибробластах. Избыточная экспрессия Dok1 не увеличивала образования филоподий в Abl- и Arg-нулевых клетках, но делала это, когда Abl повторно экспрессировался в этих клетках. Экспрессия Y361F Dok1 не увеличивала количества филоподий. Авт. отмечают также небольшие количества филоподий у Dok1-/- фибробластов и их количества не увеличивались при экспрессии Abl. Более того, обработка фибробластов дикого типа, но не Dok1-/-, с помощью Abl ингибитора, понижала количество филоподий. Итак, Dok1 и Abl, по-видимому. необходимы для эффектов др. др. при формировании и поддержании филоподий во время распластывания клеток. В соответствии с этим Dok1 и Abl присутствовали вдоль и на кончиках филоподий.
Наконец, т.к. Dok1 фосфорилированный у Y361 м. взаимодействовать с p120RasGAP или Nck, то Woodring et al. производили иммунопреципитацию с использованием лизатов от spreading клеток, и нашли Abl-стимулируемую Dok1-Nck ассоциацию. Nck1-/- Nck2-/--spreading клетки имеют меньше филоподий и когда ингибитор Abl редуцирует количество филоподий в клетках дикого типа, то он не способен к этому в Nck1-/- Nck2-/- клетках, указывая тем самым, что Nck участвует в Abl-обусловленном образовании филоподий. Имеются указания на то, что четвертичный комплекс Abl, Dok1 и Nck м. формироваться в клетках, авт. полагают, что Abl-обусловленное фосфорилирование Dok1 по Y361 даёт в результате рекрутирование Nck на периферию клетки, где происходит локальная полимеризация актина. Но как клетка решает, где будет выпячиваться филоподий и что лежит ниже Dok1-Nck комплекса и управляет сборкой актина, пока неясно.
Сайт создан в системе uCoz