Рис.1.

De novo складываение и сборка миозина поперечно-полосатых мышц анализировали с помощью экспрессии нагружденной GFP эмбриональной myosin heavy chain (GFP-myosin) в постмитотических C2C12 миоцитах, используя дефектные по репликации вирусы. На ранней стадии дифференцировки мышц GFP-myosin накапливается в широких глобулярных фокусах и коротких филаментозных структурах, которые позднее замещаются широко флюоресцирующими миофибриллами. Time-lapse микроскопия показала, что промежуточные структуры являются динамичными и присутствуют в удлинняющихся и сливающихся миоцитах и многоядерных микротрубочках. Иммуноокрашивание выявляет ко-локализацию молекулярных хаперонов (chaperones) Hsc70 и Hsp90 с GFP-myosin в промежуточных структурах, но не во взрослых миофибриллах. Неинфицированные клетки имеют сходные пробежуточные образования, это указывает на общий путь созревания миозина. Два типа чувствительных к конформации антител, которые соединяются с расправленным моторным доменом и суперскрученной конформацией в виде палочки указывают на то, что промежуточные образования, миозиновые палочки складываются, а моторный домен не складывается. ЭМ показала, что что промежуточные образования содержат рыхлые пучки филамент, окруженные богаым белком матриксом. Geldanamycin, спецмфический ингибитор Hsp90, обратимо блокирует сборку миофибрилл и запускает накопление сложенных промежуточных образований миозина. Очевидно, что мултимерные комплексы образующихся миозиновых филамент, ассоциированые с Hsc70 и Hsp90, являются промежуточными образованиями при укладке (folding) и сборке мышечного миозина.