Новая методика, базируется на способности двух белков - FK506-binding protein (FKBP) и FKBP-rapamycin-associated protein (
) - взаимодействовать в присутствии лиганда rapamycin. Pecot and Malhotra создали две конструкции: одна содержала FKBP, слитый с Golgi-белком sialyltransferase (ST-FKBP), и др. содержала FRAP, слитый с ER-белком
(Ii-FRAP).
Если Golgi сливается с ER в любое время во время митоза, то ST-FKBP д. соединяться с Ii-FRAP в присутствии rapamycin и сохраняться в ER. Но если Golgi сохраняет свою независимость, то ST-FKBP будет обнаруживаться в реформируемых мембранах аппарата Гольджи в дочерних клетках после митоза. Pecot and Malhotra нашли, что после митоза, ST-FKBP локализуется в реформированных фрагментах Golgi как в присутствии, так и в отсутствии rapamycin, это указывает на то, что Golgi не сливается с ER во время митоза.
Чтобы подтвердить это заключение, авт. использовали brefeldin A (лекарство, которое вызывает слияние ER-Golgi) и rapamycin, чтобы показать, что ST-FKBP отлавливается ER во время митоза, если мембраны ER и Golgi искусственно слиты. Этот результат показывает, что белки Golgi проходят цикл в ER во время митоза и ST-FKBP остаётся в ER.
Авт. уверены, что эта работа разрешит спор о наследовании мембран аппарата Гольджи, теперь становится очевидным, что "...the biogenesis of the Golgi apparatus in daughter cells is from preexisting Golgi elements rather than de novo".
Сайт создан в системе
uCoz