Shin, C. et al. Dephosphorylated SRp38 acts as a splicing repressor in response to heat shock. Nature427, 553–558 (2004) | | | |
It's well known that heat shock causes the repression of pre-messenger RNA splicing. Reporting in Nature, James Manley and colleagues have now identified the repressor responsible for this effect — a general splicing repressor known as
SRp38 активируется за счёт дефосфорилирования, и в самом деле, было показано что SRp38 оказывается дефосфорилировнным, когда клетки HeLa подвергаются тепловому шоку in vivo. Когда клеткам позволяли восстанавливаться, то SRp38 ревертировал к своей фосфорилированной форме. Тепловая обработка ядерных экстрактов HeLa in vitro также приводи к быстрому дефосфорилированию SRp38 и ингибиррованию splicing активности. Когда ядерным экстрактам позволяли восстанавливаться, то сплайс-активность восстанавливалась.
Прямые доказательства получены в исследованиях с истощением, в которых depletion SRp38 из ядерных экстрактов клеток, подвергнутых тепловому шоку, или ядерных экстрактов, подвергнутых тепловому шоку, приводила к восстановлению splicing активности. Последующее добавление дефосфорилированного SRp38 к истощенному ядерному экстракту восстанавливало сплайсинг.
Glutathione-S-transferase (GST) 'pull-down' assays выявил механистический сигнал. small nuclear ribonucleoprotein (snRNP) соединяется строго с GST-SRp38 слитым белком, но только когда SRp38 находится в своей дефосфорилированной форме. Предыдущие исследования показали, что взаимодействие между др. сплайс-фактором, и U1 snRNP стабилизирует распознавание с помошью U1 snRNP 5' сплайс-сатов.. Manley и др. Показали, SRp38 в своей дефосфорилированной форме вызывает строгое образования комплексов ASF/SF2-U1-snRNP на 5' сплайс-сайтах. . Это указывает на то, что дефосфорилированный SRp38 репрессирует сплайсинг путём взаимодействия U1 snRNP, и тем самым влияет на распознавание U1 snRNP 5' сплайс-сайтов
Итак, является ли SRp38-обусловленная репрессия сплайсинга важной для выживаемости клеток в условиях? Ответ, да - благодаря этому SRp38-дефицитные клетки жизнеспособны, они являются чувствительными к температуре и восстанавливаются более медленно от теплового шока, чем клетки дикого типа. Авт. Полагают, что SRp38 "...represses splicing following heat shock, at least in part, to prevent the possible accumulation of inaccurately spliced mRNA".