de Hoog, C. L., Foster, L. J. & Mann, M. RNA and RNA binding proteins participate in early stages of cell spreading through spreading initiation centers. Cell117, 649–662 (2004) | | |
FURTHER READING Aebersold, R. & Mann, M. Mass spectrometry-based proteomics. Nature422, 198–207 (2003) | | | |
WEB SITE
Using a mass-spectrometry-based technique to uncover proteins that are present in focal adhesions, Matthias Mann and colleagues have identified an early cell-spreading structure — the spreading initiation centre (SIC) — that contains RNA and RNA-binding proteins.
Техника - stable isotope labelling by amino acids in culture (SILAC) - 'метит' белки путём культивирования их в среде, которая содержит deuterium-земещённый лейцин или 13C-замещённые аргинин. Эти белки м. затем распознаваться с помощью mass spectrometry от немеченных белков, которые выделяются из клеток, растущих на нормальной среде. Авт. применили эту технику к иммунопреципитатам из лизатов слипчивых и неслипчивых фибробластов, используя антитела против важных белков фокальных адгезий , или . Выявлены многие уже известные белки фокальных адгезии, а также некоторые новые кандидаты.
Dj время характеристики одного из дифференциально экспрессирующихся белков, RACK1 (receptor for activated C kinase-1), Mann и др. установили, что клетки проходят, по крайней мере, три разные стадии распластывания (spreading) после инициального прикрепления. Циркулярные участки, которые авт. назвали 'spreading initiation centres' - представлены на ранних стадиях, но становятся всё менее обильными по мере распластывания клетки и формирования фокальных адгезий, и исчезают, когда устанавливаются фокальные адгезии. Окружающей эти SICs была оболочка из актина, которая исчезала по мере созревания фокальных адгезий в точках прикрепления для актиновых стрессовых волокон. Интересно, что SICs наблюдались только в фибробластах и нетрансформированных клетках и на физиологических субстратах, таких как fibronectin.
Авт. обнаружили, что некоторые РНК-связывающие белки, такие как , , , and , преимущественно связаны или с talin, paxillin или vinculin в слипчивых клетках. Но не только эти белки локализуются в SICs, но также те, что делают РНК. Ни один, как полагают, не присутствует в зрелых фокальных адгезиях. Наконец, наиболее удивительным оказалось, что - нарушение функции hnRNP K, hnRNP E1 и FUS/TLS с помощью антител увеличивали скорость распластывания фибробластов.
