Galy, V. et al. Nuclear retention of unspliced mRNAs in yeast is mediated by perinuclear Mlp1. Cell116, 63–73 (2004) | |
Reporting in Cell, Vincent Galy et al. have begun to unravel the molecular mechanisms underlying a process that has been largely inaccessible to experimentation — nuclear retention of unspliced mRNAs.
Анализируя структцрные белки дрожжей и , авт. сделали неожиданное открытие: Mlp1 и Mlp2 распределены асимметричено в ядерной оболочке, рядом с хроматином. Это побудило их изучить, что обусловливает такое необычное распределение Mlp.
Galy et al. нашли, что инактивация splicing фактора является ситентической леталью с MLP1 делецией. Делеция MLP1 или MLP2 не обнаруживает выраженного эффекта на splicing; однако mlp1Δ and prp18Δ мутантные линии, обе с 'leaked' intron-containing мРНК (MLP2 делеция не обнаруживает такого эффекта), a комбинирование обеих мутаций является аддитивным.
Но как действует Mlp1, чтобы сохранить РНК в ядре? Galy et al. установили, что в случае избыточной экспрессии Mlp1 внутриядерные кластеры Mlp1 отлавливают специфически интрон-содержащие мРНК, а идентифицирован в качестве РНК-зависимого Mlp1-связывающего партнёра. SF1, ка к известно, соединяется специфически с областью точки ветвления (branchpoint) интрон-содержащих РНК, так что РНК-зависимое взаимодействие между между SF1 и Mlp1 демонстрирует прямую физическую связь между Mlp1 и unspliced мРНК. Далее было установлено, что 5' сплайс-сайт обеспечивает Mlp1-зависимое сохранение.
Наконец — получены доказательства, что nucleoporin пристыковывает Mlp1 и Mlp2 в их месторасположении и что делеция его нарушает локализацию, а nup60Δ-зависимое высвобождение Mlp1, как было установлено, вызывает более тяжелый (но менее специфический) дефект текучести (leakage) и сплайсинга пре-мРНК, это указывает на то, что Nup60 также участвует в сохранении в ядре пре-мРНК.
Итак, Galy et al. впервые показали, что сплайсинг и сохранение пре-мРНК являются функционально отличными процессами и предпол