Ингибирование с Помощью Cyld

Massoumi, R. et al. Cyld inhibits tumor cell proliferation by blocking Bcl-3-dependent NF-κB signaling. Cell 125, 665–677 (2006)
Рис. \| CYLD	У людей потеря обоих аллелей CYLD вызывает возникновение злокачественных и обезображивающих опухолей кожи, наз. cylindromas. Используя клетки кожи от Cyld^-/- мышей, Reinhard Fa"ssler с коллегами показали, что deubiquitinase CYLD, помимо своих известных эффектов на сигнальном пути nuclear factor (NF)-κB, может контролировать ядерную транслокацию NF-κB ко-активатора BCL3. Авт. показали, что мыши Cyld^-/-, полученные ими более склонны к DMBA (7,12-dimethylbenz(a)anthracene) и TPA (12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate)-индуцируемым опухолям кожи по сравнению с мышами дикого типа. Инкорпорация BrdU и экспрессия Ki67 выявили повышенную пролиферацию в Cyld^-/- опухолях по сравнению с опухолями дикого типа, но не выявлено различий в вкличине апоптоза. Кроме того, опухоли Cyld^-/- обнаруживали повышенную экспрессию cyclin D1 (кодируемого Ccnd1), а повышенная экспрессия cyclin D1 наблюдалась также в изолированных первичных Cyld^-/- кератиноцитах, обработанных TPA или УФЛ. Существует ли связь между потерей CYLD и экспрессией cyclin D1? Используя метод репортеров, авт. показали, что TPA или УФЛ активируют промотор Ccnd1 в Cyld^-/- кератиноцитах NF-κB-зависимым образом, указывая тем самым, что CYLD является негативным регулятором этого пути. CYLD участвует в ингибировании tumour-necrosis factor-α (TNFα)-индуцируемой активации гетеродимера NF-κB p65–p50 частично посредством стабилизации NF-κB ингибитора IκBα. Однако, воздействие TPA не способно увеличивать p65–p50-зависимую транскрипцию, указывая тем самым. что TPA запускает активность NF-κB с помощью IκBα-независимого способа в кератиноцитах. Итак, какой из членов семейства NF-κB регулирует экспрессию cyclin D1? Трансфекция Cyld^-/- и дикого типа кератиноцитов конструкцией из Ccnd1 промотора и репортера и разных членов семейства NF-κB показала. что p50 или p52, также как и ко-активатор BCL3, активируют промотор в отсутствие CYLD. Анализ ко-иммунопреципитации показал, что CYLD ассоциирует с BCL3 в кератиноцитах в ответ на воздействие TPA, a действие TPA или УФЛ увеличивает ядерную транслокацию BCL3 в Cyld^-/- кератиноцитах, DMBA/TPA-индуцированные Cyld^-/- опухоли и cylindromas у людей. Более того, иммунопреципитация хроматина показала, что в Cyld^-/- кератиноцитах при воздействии TPA рекрутируются BCL3 и p50 или p52, но не p65, на промотор Ccnd1. Является ли deubiquitylating активность CYLD необходимой для предупреждения накопления в ядре BCL3? Воздействие TPA существенно увеличивает polyubiquitylation of BCL3 в Cyld^-/- кератиноцитах, а CYLD удаляет Lys63-сцепленные polyubiquitin цепочки с BCL3 in vivo — ubiquitin цепочки в этом месте обычно служат в качестве дока для др. белков. Каталитически неактивный CYLD неспособен предупредить накопление в ядре BCL3 и активацию промотора Ccnd1. Эти данные указывают на то, что deubiquitylation с помощью CYLD необходимо для предупреждения накопления в ядре BCL3. Предыдущие данные продемонстрировали пониженную экспрессию CYLD в опухолях почек, печени и шейки матки людей и авт. обнаружили снижение или отсутствие экспрессии CYLD в базально-клеточных и сквамозно-клеточных карциномах у людей. Следовательно, механизм CYLD-обусловленной супрессии передачи сигналов NF-κB, предположенный Fa"ssler с коллегами, важен для нескольких типов опухолей.

У людей потеря обоих аллелей CYLD вызывает возникновение злокачественных и обезображивающих опухолей кожи, наз. cylindromas. Используя клетки кожи от Cyld^-/- мышей, Reinhard Fa"ssler с коллегами показали, что deubiquitinase CYLD, помимо своих известных эффектов на сигнальном пути nuclear factor (NF)-κB, может контролировать ядерную транслокацию NF-κB ко-активатора BCL3.

Авт. показали, что мыши Cyld^-/-, полученные ими более склонны к DMBA (7,12-dimethylbenz(a)anthracene) и TPA (12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate)-индуцируемым опухолям кожи по сравнению с мышами дикого типа. Инкорпорация BrdU и экспрессия Ki67 выявили повышенную пролиферацию в Cyld^-/- опухолях по сравнению с опухолями дикого типа, но не выявлено различий в вкличине апоптоза. Кроме того, опухоли Cyld^-/- обнаруживали повышенную экспрессию cyclin D1 (кодируемого Ccnd1), а повышенная экспрессия cyclin D1 наблюдалась также в изолированных первичных Cyld^-/- кератиноцитах, обработанных TPA или УФЛ.

Существует ли связь между потерей CYLD и экспрессией cyclin D1? Используя метод репортеров, авт. показали, что TPA или УФЛ активируют промотор Ccnd1 в Cyld^-/- кератиноцитах NF-κB-зависимым образом, указывая тем самым, что CYLD является негативным регулятором этого пути. CYLD участвует в ингибировании tumour-necrosis factor-α (TNFα)-индуцируемой активации гетеродимера NF-κB p65–p50 частично посредством стабилизации NF-κB ингибитора IκBα. Однако, воздействие TPA не способно увеличивать p65–p50-зависимую транскрипцию, указывая тем самым. что TPA запускает активность NF-κB с помощью IκBα-независимого способа в кератиноцитах.

Итак, какой из членов семейства NF-κB регулирует экспрессию cyclin D1? Трансфекция Cyld^-/- и дикого типа кератиноцитов конструкцией из Ccnd1 промотора и репортера и разных членов семейства NF-κB показала. что p50 или p52, также как и ко-активатор BCL3, активируют промотор в отсутствие CYLD. Анализ ко-иммунопреципитации показал, что CYLD ассоциирует с BCL3 в кератиноцитах в ответ на воздействие TPA, a действие TPA или УФЛ увеличивает ядерную транслокацию BCL3 в Cyld^-/- кератиноцитах, DMBA/TPA-индуцированные Cyld^-/- опухоли и cylindromas у людей. Более того, иммунопреципитация хроматина показала, что в Cyld^-/- кератиноцитах при воздействии TPA рекрутируются BCL3 и p50 или p52, но не p65, на промотор Ccnd1.

Является ли deubiquitylating активность CYLD необходимой для предупреждения накопления в ядре BCL3? Воздействие TPA существенно увеличивает polyubiquitylation of BCL3 в Cyld^-/- кератиноцитах, а CYLD удаляет Lys63-сцепленные polyubiquitin цепочки с BCL3 in vivo — ubiquitin цепочки в этом месте обычно служат в качестве дока для др. белков. Каталитически неактивный CYLD неспособен предупредить накопление в ядре BCL3 и активацию промотора Ccnd1. Эти данные указывают на то, что deubiquitylation с помощью CYLD необходимо для предупреждения накопления в ядре BCL3.

Предыдущие данные продемонстрировали пониженную экспрессию CYLD в опухолях почек, печени и шейки матки людей и авт. обнаружили снижение или отсутствие экспрессии CYLD в базально-клеточных и сквамозно-клеточных карциномах у людей. Следовательно, механизм CYLD-обусловленной супрессии передачи сигналов NF-κB, предположенный Fa"ssler с коллегами, важен для нескольких типов опухолей.