Посещений:
Эндоцитоз: Вход в Молчание

Двунитчатая РНК
Saleh, M.-C. et al.

The endocytic pathway mediates cell entry of dsRNA to induce RNAi silencing.

Nature Cell Biol. 8, 793–802 (2006) Article



Рис.1.  | RNAi in Drosophila S2 cells is dependent on the length of the dsRNA


Рис.2.  | An active mechanism for uptake of long dsRNA in Drosophila S2 cells.


Рис.3.  | RNAi screen for genes involved in the RNAi pathway.


Рис.4.  | Endocytic uptake of dsRNA into Drosophila S2 cells is mediated by scavenger receptors.


Рис.5.  | Orthologues of the Drosophila genes confer an RNAi phenotype in C. elegans.

Табл.1 Identification of genes involved in RNAi function in Drosophila S2 cells

Табл.2 dsRNA uptake pathway is conserved among organisms: Drosophila orthologues affect RNAi in C. elegans

Raul Andino's laboratory

Meister, G. & Tuschl, T.

Mechanisms of gene silencing by double-stranded RNA.

Nature 431, 343–349 (2004) Article
Чтобы индуцировать RNA interference (RNAi) молчание, экзогенная double-stranded РНК (dsРНК) д. проникнуть в клетку, чтобы активировать специфический путь, который использует clathrin-обеспечиваемый эндоцитоз. Хотя большинство клеток metazoan могут принимать экзогенные dsРНК и использовать их, чтобы инициировать молчание генов, до сих пор механизм этого изучен плохо.
Авт. работали с культивируемыми Drosophila melanogaster S2 клетками и впервые показали, что поступление dsРНК из культуры зависит от их длины; dsРНК из 200 или 1000 base pairs (bp) могут заставлять молчать свои гены мишени, в то время как 21-bp малые-interfering РНК нет. Более того, низкая температура неблагоприятно влияет на поступление, это указывает на то, что поступление является активным процессом.
Andino с сотр. использовали флюоресцентную микроскопию , чтобы анализировать ранние фазы поступления, Они установили, что dsРНК быстро соединяется с клеточной поверхностью в виде точечного паттерна и затем интернализуется, но остается в точечных структурах. Данные флюоресцентной микроскопии и биохимических подходов показали, что путь поступления разный для dsРНК и ДНК, и показали также, что dsРНК, по-видимому, накапливается во внутриклеточных структурах.
Функциональный скрининг по всему геному - "RNAi of RNAi approach" - был использован для идентификации компонентов пути поступления dsРНК. Авт. использовали библиотеку dsРНК, в которой находится 7216 D. melanogaster генов с известной гомологией генам Caenorhabditis elegans и млекопитающих и они идентифицировали 23 гена, которые специфически участвуют в проникновении экзогенной dsРНК и её процессинге. Удивительно, многие из этих генов кодируют компоненты эндоцитотического пути, такие как clathrin, a фармакологической ингибирование этого пути блокирует поступление dsРНК и молчание генов.
Нокдаун ортологов идентифицированных генов у целых C. elegans организмов инактивирует RNAi реакцию. Этот эндоцитический путь поступления dsРНК, следовательно, эволюционно законсервирован и функционально активен у интактных организмов. Т.к. главным препятствием к терапевтическому использованию RNAi является доставка, то Andino с коллегами полагают, что использование этого натурального пути проникновения может привести к разработке эффективных нетоксических подходов к доставке dsРНК.
Сайт создан в системе uCoz