Стабильность Argonaute 2

Prolyl 4-hydroxylation regulates Argonaute 2 stability Hank H. Qi, Pat P. Ongusaha, Johanna Myllyharju, Dongmei Cheng, Outi Pakkanen, Yujiang Shi, Sam W. Lee, Junmin Peng & Yang Shi Nature, V.455, No.7211, P.421-424, 2008 \| nature07186
	Collagen prolyl-4-hydroxylase (C-P4H} катализирует гидроксилирование пролина коллагенов в X-Pro-Gly (X-P-G) триплетах. Идентифицированы три изоформы (I, II, III) α-субъединиц³ и все они взаимодействуют с β-субъединицей, чтобы сформировать активные C-P4H α₂β₂ тетрамеры. Однако, эти изоформы обнаруживают дифференциальные паттерны и уровни тканевой экспрессии. Помимо коллагенов и др. белки, содержащие коллаген-подобные последовательности, такие как легочный сурфактант, apoproteins, complement protein Clq и 18S форма acetylcholinesterase, также гидроксилируются с помощью C-P4H (ref. 3). C-P4H обеспечивает также гидроксилирование X-Pro-Ala (X-P-A) мотива, обнаруживаемого в комплементном белке Clq и тапа IV коллагена⁴. Триплеты X-P-G и X-P-A были идентифицированы и в Ago белках (Supplementary Fig. 1). Три X-P-G триплета (119-121, 522-524,699-701) были найдены в Ago2. Человеческие Argonaute (Ago) белки существенные компоненты RNA-induced silencing complexes (RISCs). Argonaute 2 (Ago2) обладает P-element-induced wimpy testis (PIWI) доменом. который укладывается подобно RNase H и является ответственным за целанепарвленно расщепление РНК при RNA interference¹. Белки, такие как Dicer, TRBP, MOV10, RHA, RCK/p54 и KIAA1093, ассоциируют с Ago белками и участвуют в процессинге малых РНК, загрузке RISC и локализации Ago белков в цитоплазматических телах, осуществляющих процессинг мРНК^1,2. Однако, механизмы. которые регулируют RNA interference остаются неизвестными. Описываются физические взаимодействия между Ago2 и the α-(P4H-α(I)) и β-(P4H-β) субъединицами type I collagen prolyl-4-hydroxylase(C-P4H(I)). Масс-спектрометрический анализ идентифицировал гидроксилирование эндогенного Ago2 по пролину 700. In vitro, как Ago, так и Ago4, по-видимому, гидроксилируются более эффективно, чем Agol и Ago3 с помощью рекомбинантной C-P4H(I)человека. Важно, что клетки человека, истощенные по P4H-α(I) или P4H-β с помощью коротких шпилечных РНК, и P4H-α(I) нулевые мышиные эмбриональные фибробласты обнаруживают снижение стабильности Ago2 и нарушение short interfering RNA запрограммированной активности RISC. Более того, мутации proline 700 в аланин также ведут к дестабилизации Ago2, тем самым связывая Ago2 P700 и гиюроксилирование этого остатка с регуляцией стабильности. Эти находки по идентификации гидроксилирования в качестве пост-трансляционной модификации важны для стабильности Ago2 и эффективности RNA

Collagen prolyl-4-hydroxylase (C-P4H} катализирует гидроксилирование пролина коллагенов в X-Pro-Gly (X-P-G) триплетах. Идентифицированы три изоформы (I, II, III) α-субъединиц³ и все они взаимодействуют с β-субъединицей, чтобы сформировать активные C-P4H α₂β₂ тетрамеры. Однако, эти изоформы обнаруживают дифференциальные паттерны и уровни тканевой экспрессии. Помимо коллагенов и др. белки, содержащие коллаген-подобные последовательности, такие как легочный сурфактант, apoproteins, complement protein Clq и 18S форма acetylcholinesterase, также гидроксилируются с помощью C-P4H (ref. 3). C-P4H обеспечивает также гидроксилирование X-Pro-Ala (X-P-A) мотива, обнаруживаемого в комплементном белке Clq и тапа IV коллагена⁴. Триплеты X-P-G и X-P-A были идентифицированы и в Ago белках (Supplementary Fig. 1). Три X-P-G триплета (119-121, 522-524,699-701) были найдены в Ago2.

Человеческие Argonaute (Ago) белки существенные компоненты RNA-induced silencing complexes (RISCs). Argonaute 2 (Ago2) обладает P-element-induced wimpy testis (PIWI) доменом. который укладывается подобно RNase H и является ответственным за целанепарвленно расщепление РНК при RNA interference¹. Белки, такие как Dicer, TRBP, MOV10, RHA, RCK/p54 и KIAA1093, ассоциируют с Ago белками и участвуют в процессинге малых РНК, загрузке RISC и локализации Ago белков в цитоплазматических телах, осуществляющих процессинг мРНК^1,2. Однако, механизмы. которые регулируют RNA interference остаются неизвестными. Описываются физические взаимодействия между Ago2 и the α-(P4H-α(I)) и β-(P4H-β) субъединицами type I collagen prolyl-4-hydroxylase(C-P4H(I)). Масс-спектрометрический анализ идентифицировал гидроксилирование эндогенного Ago2 по пролину 700. In vitro, как Ago, так и Ago4, по-видимому, гидроксилируются более эффективно, чем Agol и Ago3 с помощью рекомбинантной C-P4H(I)человека. Важно, что клетки человека, истощенные по P4H-α(I) или P4H-β с помощью коротких шпилечных РНК, и P4H-α(I) нулевые мышиные эмбриональные фибробласты обнаруживают снижение стабильности Ago2 и нарушение short interfering RNA запрограммированной активности RISC. Более того, мутации proline 700 в аланин также ведут к дестабилизации Ago2, тем самым связывая Ago2 P700 и гиюроксилирование этого остатка с регуляцией стабильности. Эти находки по идентификации гидроксилирования в качестве пост-трансляционной модификации важны для стабильности Ago2 и эффективности RNA

Prolyl 4-hydroxylation regulates Argonaute 2 stabilityHank H. Qi, Pat P. Ongusaha, Johanna Myllyharju, Dongmei Cheng, Outi Pakkanen, Yujiang Shi, Sam W. Lee, Junmin Peng & Yang Shi Nature, V.455, No.7211, P.421-424, 2008 | nature07186

Prolyl 4-hydroxylation regulates Argonaute 2 stability
Hank H. Qi, Pat P. Ongusaha, Johanna Myllyharju, Dongmei Cheng, Outi Pakkanen, Yujiang Shi, Sam W. Lee, Junmin Peng & Yang Shi
Nature, V.455, No.7211, P.421-424, 2008 | nature07186