Функция MicroRNAs (miRNAs) в пост-транскрипционном молчании генов за счет непосредственного ингибирования трансляции мРНК или за счет индукции деаденилирования мРНК, которое способствует распаду мРНК. Fabian et al. предоставили новую информацию о механизме, с помощью которого miRNAs способствуют деаденилированию мРНК и идентифицировали poly(A-binding protein (PABP) и deadenylase CCR4-associated factor 1 (CAF1; также известный как CNOT7) в качестве критических факторов в этом процессе.

Чтобы понять, как miRNAs вызывают молчание мРНК за счет удаления poly(A) хвоста, авт. предприняли свои эксперименты в экстрактах из клеток асцита от мышей Krebs 2, которые содержат let-7 miRNA, и как было установлено, ингибируют трансляцию мРНК. Инкубация мРНК с Krebs 2 экстрактами приводила к образованию новых видов мРНК, являющихся деаденилированной формой оригинальной мРНК. Образование деаденилированных видов мРНК зависело от let-7, т.к. добавление антисмысловых облигонуклеотидов, комплементарных let-7 miRNA устраняло эту реакцию. Ингибирование инициации трансляции или элонгации в Krebs 2 экстрактах не мешало деаденилированию мРНК, указывая тем самым, что два механизма замалчивания оперируют независимо. Трансляция также может быть частично репрессирована перед выявлением деаденилирования, указывая тем самым, что два механизма действуют кооперативно во времени.

Затем авт. попытались идентифицировать белки, которые участвуют в miRNA-обусловленном деаденилировании мРНК. miRNAs взаимодействуют с белками Argonaute (Ago), чтобы сформировать RNA-induced silencing complex (RISC), поэтому они искали белки, которые взаимодействуют с AGO1 (также известным как EIF2C1) и AGO2 (также известным как EIF2C2). Они выделили CAF1 и PABP; CAF1 ранее не был описан как взаимодействующий с Ago белками у млекопитающих. Интересно, что деплеция CAF1 из Krebs 2 экстрактов снижает уровни деаденилирования и частично уменьшает ингибирование трансляции мРНК. Эта находка подтверждает, что CAF1, по крайней мере частично, обеспечивает деаденилирование мРНК. Сходный эффек на деаденилирование мРНК наблюдался при истощении PABP из Krebs 2 экстрактов, указывая тем самым, что PABP также играет роль в этом процессе.

Молчание мРНК также нуждается в GW182 белках, которые взаимодействуют с AGO2 и являются частью RISC. Инкубация мРНК в Krebs 2 экстрактах с GW182 фрагментом, который конкурирует с GW182 белками за связывание AGO2 ведет к снижению деаденилирование мРНК, указывая тем самым, что GW182 белки участвуют в этом процессе. GW182 белки были фактически обнаружены как непосредственно взаимодействующие с PABP. В частности, С-терминальный фрагмент trinucleotide repeat-containing 6C (TNRC6C) - паралог GW182 человека, который включает в себя DUF (domain of unknown function) и RRM (RNA recognition motif) - взаимодействует со второй половиной С-конца PABP. Блокирование взаимодействия GW182-PABP ингибирует деаденилирование мРНК, подчеркивая важность этого процесса.

Итак. эти находки выявляют механизм молчания мРНК за счет деаденилирование мРНК, которое использует рекрутирование deadenylase CAF1 и PABP на RISC. Авт. полагают, что PABP соединять вместе poly(A) хвост и RISC-рекрутируемую deadenylase.