Прежде чем стать ассоциированной с белками Argonaute (AGO) и осуществить свои регуляторные эффекты microRNAs (miRNAs) существуют в виде дуплекса с комплементарной нитью miRNA*. До недавнего времени только miRNA нить рассматривалась, как выбираемая для AGO, а miRNA*s , как полагали, деградируют как нефункциональные ко-продукты метаболизма miRNA. Однако три новых исследования показали, что miRNA*s обильны и активно выбираются для AGO и могут выполнять регуляторную функцию у Drosophila melanogaster.

Okamura et al., Czech et al. и Ghildiyal et al. установили, что в противоположность miRNAs, miRNA*s обычно модифицируются с помощью 2'-O-метилирования по их 3' концам. Small interfering RNAs (siRNAs), которые соединяются с AGO2, чтобы обеспечить молчание, также модифицируются по своим 3' концам. Авт. показали, что в отличие от своей партнерской нити miRNA, которая преимущественно инкорпорируется в AGO1, miRNA*s строго ассоциирует с AGO2.

Необходимы ли siRNA факторы для накопления и загрузки miRNA*s в AGO? Okamura et al. и Czech et al. использовали RNAi, чтобы вызывать нокдаун канонической miRNA и siRNA факторов в клетках S2, и установили, что miRNA*s исчезают из AGO2 после нокдауна miRNA фактора Dicer-1 (Dcr-1), а также после нокдауна siRNA фактора Dcr-2 и его партнера R2D2. Сходным образом, Ghildiyal et al. установили, что факторы Dcr-2 и R2D2 необходимы in vivo у взрослых мух, чтобы загружать miRNA* на AGO2. Это указывает на то, что накопление и AGO-загрузка miRNA*s зависит от уникальной комбинации канонических miRNA и siRNA факторов.

Чтобы исследовать потенциальные функции miRNA*s, Czech et al. создали miRNA и miRNA* 'sensor constructs' и экспрессировали их в S2 клетках, в которых компоненты пути miRNA и siRNA посланы в нокдаун. истощение канонического miRNA фактора Drosha приводило к дерепрессии miRNA sensors; однако, это также вызывало дерепрессию сенсоров miRNA*, это указывает на то, что miRNA*s может репрессировать мРНК мишени. Истощение Dcr-1 также ведет к дерепрессии обоих типов сенсоров. В соответствии с загрузкой miRNA* в AGO2, сенсоры miRNA* были дерепрессированы, когда AGO2 был деплетирован, и это зависело от Dcr-2 и R2D2. Используя клональный анализ у трансгенных по сенсору мух, они показали, что miRNA*s могут репрессировать мишени in vivo.

Невероятно, что обе нити miRNA дуплекса одновременно взаимодействуют с обоими AGOs, т.к. Czech et al. также установили, что истощение любого из белков AGO ведет к увеличению нитей miRNA, ассоциированных с другим AGO. Более того, Ghildiyal and colleagues идентифицировали miRNA дуплексы, обе нити которых отбирались только на один AGO. Эти данные указывают на то, что miRNA дуплексы независимо сортируются в зависимости от того, будут ли они рассматриваться в перспективе miRNA или miRNA* нити. Три работы проливают свет на набор ключевых последовательностей и структурные свойства, которые детерминируют выбор с помощью AGO miRNA дуплекса: сортировка на белок AGO2 ассоциирует с высшей степенью с общего спаривания оснований в дуплексе, особенно со спариванием оснований нуклеотидов 9 и 10 от 5' конца, тогда как присутствие 5' U, по-видимому, важно для сортировки на AGO1.

Находки, что обе нити дуплекса miRNA активно отсортировываются и могут замалчивать мРНК мишени расширяет регуляторное влияние этих видов РНК.