Посещений:
ТАКТИЛЬНАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ

Клеточная Биология

The cell biology of touch
Ellen A. Lumpkin, Kara L. Marshall, and Aislyn M. Nelson
JCB vol. 191 no. 2, 237-248 doi: 10.1083/jcb.201006074 © 2010

The sense of touch detects forces that bombard the body’s surface. In metazoans, an assortment of morphologically and functionally distinct mechanosensory cell types are tuned to selectively respond to diverse mechanical stimuli, such as vibration, stretch, and pressure. A comparative evolutionary approach across mechanosensory cell types and genetically tractable species is beginning to uncover the cellular logic of touch reception.

Box 1. Glossary of mechanosensory terms

Touch hypersensitivity. A heightened sensory response to force stimuli, which can accompany inflammation, injury, or disease.
Mechanotransduction. Conversion of a force into a cellular signal.
Sensory modality. A specific aspect of a stimulus that is encoded by a sensory receptor cell. Examples of primary sensory modalities include touch, pain, hearing, and taste. Examples of touch modalities include vibration, stretch, and pressure.
Nociceptor. A somatosensory neuron activated by noxious mechanical, thermal, or chemical stimuli.
Sensory afferent. A somatosensory neuron's bifurcating axon. Peripheral branches innervate skin and internal organs, whereas central branches innervate spinal cord and hindbrain.
End organs. The specialized terminals of peripheral afferents that transduce sensory stimuli into action potentials.
Rapidly adapting afferent. Light-touch receptors that respond at the onset and offset of a sustained mechanical stimulus. These receptors respond robustly to vibration.
Adaptation. A change in neuronal output to a constant sensory input.
Mechanical threshold. The amount of force necessary to evoke a response in a given mechanosensory receptor cell.
Slowly adapting afferent. Light-touch receptors that fire throughout a sustained mechanical stimulus.
Hair cells. Mechanosensory receptor cells of the vertebrate inner ear and lateral line organs that mediate hearing and balance.
Proprioceptors. Sensory neurons that monitor limb position to govern coordinated movements. These sensory receptors innervate joints and specialized muscle fibers.
Receptor potential. The change in membrane potential that occurs when a sensory stimulus activates transduction channels.
Osmosensitive channels. Membrane proteins gated by differential changes in the solute concentration (osmolarity) of a cell's extracellular and intracellular environments.
Stereocilia. In vertebrate hair cells, specialized microvilli that are sites of mechanosensory transduction.
Hemidesmosome. Junctional complex between an epithelial cell and the basal lamina.
Paracrine signaling. The ability to communicate with surrounding cells through the secretion of bioactive compounds.


Ощущение силы является фундаментальным для развития и жизнеспособности многоклеточных организмов. Клетки пдвергаются действию ряда сил, включая давление, растягивание, ток и звуковые волны. Чтобы справляться с этим разнообразием, существуют специализированные механосенсорные клетки, чрезвычайно чувствительные, избирательные и быстрые (Chalfie, 2009). Силы, оказывающие воздействие на кожу, воспринимаются рецепторами прикосновения.
Касания важны для несметнго количества поведенческих реакций, от избегания физического увечья до социаьного общения. От Caenorhabditis elegans до млекопитающих, размножение видов базируется зависимом от касаний половом поведении (Barr and Sternberg, 1999; Selden, 2004). У млекопитающих касания также необходимы для успешного выращивания детенышей—когнитивное развитие отстает у лишенных касаний детей (Kaffman and Meaney, 2007). Тактильные рецепторы на кончиках наших пальцев важны для тонкой тактильной остроты, это позволяет нам манипулировать с объектами с высокой точностью. Мы зависим от этих навыков при выполнении бесчетного количества задач от земных (печатанья e-mail) до трансцедентальных (исполнение концерта Моцарта). Хотя и обязательные в повседневной жизни восприятие касаний может быть разрушительным при болезнях и повреждениях, когда дерегуляция передачи сенсорных сигналов вызывает гиперчувствительность к прикосновениям и хроническую боль (Gilron et al., 2006).
Среди Аристотелевских пяти первичных чувст, прикосновения недостаточно изучены на клеточном уровне. Последние три декады генетический скрининг у C. elegans и Drosophila melanogaster выявил большое количество молекул, необходимых для восприятия касаний. Недавние исследования начали выяснять механизмы, с помощью которых эти молекулы контролируют чувствительность к воздействиям. Анализ восприятия прикосновений у млекопитающих находится в самом начале. Здесь мы рассмотрим наиболее широко используемые модельные системы и вытекающие биологические принципы, которые управляют тактильной чувствительностью и подчеркнем оставшиеся открытыми вопросы в этой области. Механотрансдукция в др. типах клеток и сенсорных модальностях описана в недавних обзорах (Kung, 2005; Chalfie, 2009). Выделенные курсивом термины представлены в Box 1.



A medley of mechanoreceptors


Mammalian touch receptors.


Огромное разнообразие соматосенсорных нейронов иннервирует нашу кожу, чтобы инициировать ощущение прикосновения и боли (Fig. 1). Умение различать прикосновения обеспечиваются рецепторами мягкого прикосновения, которые активируются безобидными механическими стимулами.Напр., копьевидные окончания отвечают на двжения волос, Pacinian корпускулы и Meissner’s корпускулы являются рецепторами вибрации, которые передают textural информацию, а комплексы из Merkel клеток и нейритов кодируют свойства пространственных объектов, такие как края и изгибы. Восприятие боли обеспечивается nociceptors, которые являются свободными нервными окончаниями, которые отвечают на вредные стимулы. fПомимо эти категорий существуют многочисленные классы соматосенсорных нейронов, которые могут быть различны по их функционвльным свойствам и паттерну иннервации.

Figure 1. Touch receptors in mammalian skin. Touch-sensitive afferents that innervate mammalian skin display morphological, functional, and developmental diversity. As shown, lanceolate endings, Merkel cell–neurite complexes, Ruffini endings, and free nerve endings innervate hairy skin. These receptors have unique neuronal outputs, making classification feasible by electrophysiological recording from intact tissue. Lanceolate endings serve as rapidly adapting or down hair afferents. The latter are exceptionally sensitive light-touch receptors that depend on Neurotrophin-4 for proper development (Stucky et al., 1998). Merkel cell–neurite complexes mediate slowly adapting type I (SAI) responses, which are characterized by an irregular firing pattern during sustained pressure (Wellnitz et al., 2010). Although their presence in different species is debated, Ruffini endings have been proposed to mediate stretch-sensitive slowly adapting type II (SAII) responses (Chambers et al., 1972). Developmental pathways have not yet been defined for these receptors. Free nerve endings, which abundantly innervate the epidermis, include nociceptors and low-threshold C-fibers (Seal et al., 2009). Pacinian corpuscles are lamellar vibration receptors that produce rapidly adapting responses. In glabrous skin of the palms and fingertips, Pacinian corpuscles, rapidly adapting Meissner’s corpuscles (not depicted), Merkel cell–neurite complexes, and free nerve endings make up the majority of touch receptors.

Соматосенсорные нейроны обладают общим планом строения тела. Их тела сгруппированы в trigeminal ганглий вблизи основания черепа или в dorsal root ganglia (DRG) образующие гнёзда в каждом позвонке. Каждый соматосенсорный нейрон имеет аксон, наз. сенсорным афференитным, которые служит в качестве клеточного кабеля, которые распространяет электрические импульсы или потенциал действия от тела к ЦНС. Периферические веточки этих афферентных волокон, которые иннервируют кожу и др. органы, преобразуют сенсорные стимулы в потенциалы действия.
В коже множество периферических афферентных окончаний образуют комплексы в виде концевых органов, чья структура соответствует их реакциям на силовые воздействия. Напр., Pacinian корпускулы являются заключенными в ламеллы быстро приспосабливающиеся афферентные окончания, которые избирательно возбуждаются в начале и при окончании длительного прикосновения (Fig. 1). Эти тонкие платинки (lamellae) действуют как механические фильтры, управляющие адаптацией (Loewenstein and Mendelson, 1965); , однако, недавние работы показали. что они также высвобождают нейротрансмиттеры, чтобы вызывать сенсорные реакции (Pawson et al., 2009). Др. рецептор быстрой адаптации, Meissner’s корпускулы, иннервируются тремя разными типами сенсорных афферентных окончаний, это подчеркивает сложность чувствительных к прикосновению концевых органов (Pare et al., 2001).
Вместе с морфологией, электрофизиологические свойства могут быть использованы для группировки тактильных рецепторов (Fig. 1). Афферентные окончания грубо могут быть классифицированы как Aβ, Aδ или C-волокна по скорости распространения потенциала их действия, которая зависит от толщины миэлина. Они могут быть в дальнейшем различены по механическим порогам, адаптации, паттерну возбуждения и виду ощущения (modality), или по механическим стимулам, на которые они отвечают. Большинствоt Aβ афферентных окончаний, которые плотно покрыты миэлином, обладают низкими механическими порогами и поэтому скорее всего являются рецепторами легких касаний. Большинство не миэлинированных C-волокон и покрытые тонким слоем миэлина Aδ афферентных волокон, как полагают. являются ноцицепторами (nociceptors), исходя из их высоких механических порогов и паттернов проекций в ЦНС ( rev. Smith and Lewin, 2009). Другие, включая подшерсток, или D-hair, афферентные волокна и низко-пороговые C-волокна, обладают механическими порогами ниже ранганоцицепторов. Хотя функция низко-пороговых C-волокон неизвестна, они, как полагают, вносят вклад гиперчувствительные прикосновения после повреждений (Seal et al., 2009) или в аффективный или эмоциональный компонент касаний (Olausson et al., 2002; Loken et al., 2009).
Были начаты онтогенетические исследования, чтобы определить пути транскрипционных факторов и ростовых факторов, которые лежат в основе разнообразия чувствительных к прикосновениям афферентных волокон (Fig. 1; Luo et al., 2007). Напр., некоторые ноцицепторы нуждаются в nerve growth factor (NGF) и его рецепторе TrkA для постнатального выживания. Др. ноцицепторы экспрессируют Runx1, транскрипционный фактор, и Ret, рецептор для членов семейства производных глии нейротрофных факторов. Сенсорные нейроны, отличающиеся по транскрипционному фактору MafA и ранней экспрессии Ret, иннервируют волосяные фолликулы, Pacinian тельца и Meissner’s тельца (Bourane et al., 2009; Luo et al., 2009).
Большинство комплексов Merkel клетка–нейрит нуждается в neurotrophin-3 (NT-3) bd его рецепторе TrkC для постнатального выживания (Airaksinen et al., 1996). Эти чрезвычайно чувствительные к прикосновению рецепторы обеспечивают slowly adapting type I (SAI) реакции (Yoshioka et al., 2001; Woodbury and Koerber, 2007). Чтобы соотв. образом закодировать тактильные стимулы, SAI аферентные волокна нуждаются в присутствии клеток Merkel, которые, по-видимому, являютсясенсорными клетками (Maricich et al., 2009). В тесной параллели с волосковыми клетками, которые являются механосенсорными рецепторами во внутреннем (Schwander et al., 2010), клетки Merkel являются эпителиальными специализациями у позвоночных, чьё развитие зависит от транскрипционного фактора Atonal 1 (Atoh1; Maricich et al., 2009; Morrison et al., 2009; Van Keymeulen et al., 2009).
Трансгенные мыши были преобразованы, чтобы экспрессировать маркеры с субнаборах клеток тактильных рецепторов, включая рецепторы легкого касания (Hasegawa and Wang, 2008; Bourane et al., 2009; Luo et al., 2009), клетки Merkel (Lumpkin et al., 2003), низко-пороговые C-волокна (Q. Liu et al., 2007; Seal et al., 2009) и C-ноцицепторы (Stirling et al., 2005; Zylka et al., 2005). Наиболее пригодны маркеры, метящие многие классы тактильных рецепторов; , однако, по мера роста списка, генетичеки закодированные маркеры станут способом определения молекулярных отличий, которые диктуют уникальные реакции в субтипах тактильных рецепторов (Zhang et al., 2002; Haeberle et al., 2004).

C. elegans touch receptors.


Крошечные нематоды C. elegans, обнаруживают целый репертуар поведений вызываемых воздействиями, инициируемый механосенсорными нейронами, которые составляют примерно 10% от всей нервной системы (Fig. 2 A; Goodman, 2006). Прикосновении инициирует защитное поведение, которое включает ускорение хода, чтобы избегнуть действующих на заднюю часть стимулов, и задний ход или вращение головы для избегания передних прикосновений. Мягкие касания тела передаются с помощью тактильных рецепторных нейронов, которые простирают свои нейриты вдоль всего тела (Fig. 2 A, blue; Sulston et al., 1975; Chalfie and Sulston, 1981). Грубые воздействия определяются с помощью других нейронов, со сложными сенсорными дендритами, которые покрывают стенку тела (Fig. 2 A, red; Way and Chalfie, 1989; Chatzigeorgiou et al., 2010). Снабженные ресничками механосенсорные нейроны, иннервирующие нос, опосредуют прикосновения и физическое восприятие частиц пищи, они влияют на поведение поиска пищи (Fig. 2 A, green; Kaplan and Horvitz, 1993; Sawin et al., 2000; Li et al., 2006; Kindt et al., 2007). Половое поведение базируется на снабженных ресничками, специфичными для самцов, нейронами, называемыми сенсорными лучами (sensory rays) (Fig. 2 A, orange; Liu and Sternberg, 1995; Barr and Sternberg, 1999; T. Liu et al., 2007).

Figure 2. Mechanosensory transduction in C. elegans and Drosophila. (A) Mechanosensory neurons of C. elegans include gentle body touch neurons (blue), multidendritic harsh-touch neurons (red), ciliated neurons (green) required for nose-touch (ASH, FLP, and OLQ) or proper foraging behaviors (CEP, ADE, and PDE [not indicated]), and ciliated male-specific neurons (orange). For paired neurons, only one is shown. The branching menorahs of the PVD cell cover both sides of the worm, but only one side is shown for clarity. (B) An idealized mechanosensory current from PLM, a body touch neuron, is shown below the corresponding force stimulus. Force conveyed directly through contact with the body wall is sufficient to depolarize touch-sensitive neurons. This current is carried by MEC-4 transduction–channel complexes. (C) Drosophila bristle morphology. Bristle movement deforms the dendritic sheath of the mechanosensory neuron, which leads to neuronal excitation. (D) Bristle mechanoreceptor currents are recorded extracellularly in a transepithelial configuration, causing the current to appear opposite from C. elegans touch receptors; however, both currents are excitatory. Bristle drawing adapted with permission from Jarman, 2002.

Благодаря изобилию подходов к анализу нейронов нервной системы C. elegans , механотрансдукция оказалась наиболее понятной у этого организма. Chalfie and colleagues изобрели простые поведенческие методики для мягких прикосновений к телу и скринингу мутаций, которые избирательно вызывали mechanosensory аномалии (mec) без нарушения локомоции (Sulston et al., 1975; Chalfie and Sulston, 1981; Chalfie and Au, 1989). Дополнительные исследования выявили причины реакций на прикосновения к носу и грубые прикосновения к телу (Way and Chalfie, 1989; Colbert et al., 1997; Hart et al., 1999; Chatzigeorgiou et al., 2010). Использовали устранение с помощью лазера бомбардируемых нейронов для изучения поведения, вызываемого прикосновениями. Кроме того механические реконструкции картировали коммуникабельность определенных нервных сетей. Более того, механосенсорные молекулы могут быть отнесены к сигнальным путям с помощью физиологических подходов, включая получение картин in vivo и электрофизиологию (Fig. 2 B).

Drosophila mechanosensory neurons.


Механосенсорные гены Drosophila были идентифицированы благодаря передовым генетическим скринингам в отношении нечувствительности к мягким прикосновениям, пагубным стимулам и "пениею" перед спариванием (Kernan et al., 1994; Eberl et al., 1997; Tracey et al., 2003). Подобно червям и млекопитающим мухи обладают немалым ассортиментом механосенсорных нейронов, важных для выживания (for review see Kernan, 2007; Smith and Lewin, 2009). Помимо тактильных рецептров Drosophila обладает аудиторными рецепторами, чтобы различать "песни" спаривания, измеряемые датчиками деформаций крыльев мух, и проприоцепторами, чтобы координировать свои 6 ног. Даже в блогоприятных лабораторных условиях механосенсорные мутанты гибнут из-за полной несогласованности.
Тела мух нашпигованы типа I реснитчатыми механосенсорными рецепторами. такими как хордотональные органы и щетинки (Fig. 2; Kernan, 2007). Хордотональные органы, которые являются рецепторами растяжения, закреплены на коже или кутикуле, они замещают мухам ухо и вносят вклад в восприятие положения собственного тела (proprioception). Щетинки служат служат в качествие приниципиальных проприоцепторов и тактильных рецепторов. Эти механосенсорные органы в целом иннервируются одиночным сенсорным нейроном, которые простирает сенсорную ресничку в расположенную поверх структуру (Fig. 2 C). Щетинки действуют как рычаги для передачи силы ресничке, прекрепленной к их основанию с помощью древовидной шапочки. Такому сдавливанию мембраны реснички противодействует пучок трубочек, набор микротрубочек в сердцевине дендрита. Возникающее в результате сдавливание является предположительно пропускным стимулом для трансдукционных каналов, которые несут катион-избирательные, адптивные токи удивительно сходные с теми, что в волосковых клетках позвоночных (Fig. 2 D).
Типа II механосенсорные нейроны являются нейронами без ресничек, которые иннервируют кутикулу (Kernan, 2007). Их мультидендритная морфология напоминает соматосенсорные нейроны млекопитающих и тактильные рецепторы грубых воздействий на тело C. elegans (Chatzigeorgiou et al., 2010; Oren-Suissa et al., 2010; Smith et al., 2010). Подобно ноцирецепторам, по крайней мере, некоторые из этих нейронов ощущают грубые касания и панубный жар (Tracey et al., 2003; Zhong et al., 2010).

Touchy ion channels


Ионные каналы являются ключевыми компонентами трансдукционных каскадов, которые превращают энергию стимулов в изменения мембранного потенциала. В большинстве случаев возникающий в результате рецепторный потенциал запускает потенциалы действия, которые передают сенсорную информацию с высокой точностью (Fig. 3). Хотя трансдукционные каналы известны для большинства сенсорных видов ощущений (modalities), те, что используются для прикосновения и слуха чрезвычайно трудны для идентификации. У беспозвоночных ведущие кандидаты приходятся на семейства degenerin/epithelial Na+ channel (Deg/ENaC) и transient receptor potential (TRP).

Figure 3. Molecules that govern touch sensitivity in mammalian somatosensory neurons. Classes of ion channels that transduce or modulate touch sensitivity are listed in bold. Listed below are genes that have been implicated in mammalian touch responses or pathologies by genetic studies. Transduction channels (cyan) convert force into receptor currents, which then trigger action potentials by opening voltage-activated sodium and potassium channels (blue). This signal travels to the brain to alert the organism of force stimuli. Touch sensitivity is also dictated by ion channels that modify the signal or set membrane excitability (green). Touch deficits result from mutations in voltage-activated sodium channels (Nassar et al., 2004; Cox et al., 2006), two-pore potassium channels (encoded by KCNK genes), ASIC subunits, which are encoded by amiloride-sensitive cation channel (ACCN) genes, and TRP channels, such as TRPA1. Stomatin-domain proteins (yellow) alter touch sensitivity in some mammalian sensory neurons (Martinez-Salgado et al., 2007; Wetzel et al., 2007).

Models of force gating.


В механосенсорных клетках трансдукционные каналы, как полагают, непосредственно управляются силовым воздействием из-за их суб-миллисекудного времени реакции (Corey and Hudspeth, 1979; Walker et al., 2000; O’Hagan et al., 2005; Kang et al., 2010). Подобно бактериальным чувствительным к осмотическому давлению каналам (Box 2), эукариотические механотрансдукционные каналы могут быть чувствительными к растягиванию каналами, управляемые мембранными силами (Kung, 2005; Lumpkin and Caterina, 2007). В некоторых механосенсорных клетках управление трансдукционными каналами нуждается в связи с цитоскелетом или внеклеточным матриксом (ECM). Такие связи могут быть купированы непосредственно с трансдукционными каналами, т.к. они действуют на механочувствительные интегрины. Альтернативно, связи могут контролировать деформацию мембраны вокруг чувствительных к растяжению каналов. Модель связок подкрепляется изобилием генетических и биофизических исследований волосковых клеток (Assad et al., 1989; Vollrath et al., 2007; Schwander et al., 2010).



Box 2. Ancient mechanotransduction channels

Хотя механотрансдукция существует в мириадах форм метазоа, ощущение механического воздействия происходит от одноклеточных организмов. Первым было использование ощущение осмотического давления (osmosensation), которая позволяла клетке поддерживать целостность мембран при конфронтации с варьирующими жидкими внешними средами. Фактически, наиболее тщательно охарактеризованными механотрансдукционными каналами являются Msc каналы Escherichia coli (MscL, MscS и MscM), которые действуют как экстренные клапаны высвобождения, чтобы изгонять раствор в присутствии гипотонического наружного раствора (Berrier et al., 1996). Эта быстрая реакция предупреждает лизис в результате повышенного осмотического давления внутри клетки.
Хотя Msc каналы не сохранились у позвоночных, их гомологи присутствуют у членов Archaea (Kloda and Martinac, 2001). Единственные эукариотические гомологи Msc каналов найдены у растений. Эти MscS-like (MSL) каналы, скорее всего, выполняют сходную функцию, позволяя растениям корректировать неподходящий клеточный тургор (Peyronnet et al., 2008).


Deg/ENaC channels.


Лучше всего охарактеризованным эукариотическим механотрансдукционым каналомявляется MEC-4 комплекс, которые преобразуетмягкие прикосновения к телу у C. elegans (Fig. 4; Chalfie, 2009). Deg/ENaC субъединицы MEC-4 и MEC-10 формируют суть этого мультипротеинового комплекса (Goodman et al., 2002). Активность канала драматически увеличивается дополнительными субъединицами MEC-6 и MEC-2, stomatin доменоыми белками, которые связывают cholesterol (Chelur et al., 2002; Goodman et al., 2002; Huber et al., 2006; Brown et al., 2008). Они являются важными компонентами, т.к. мутации в каждой из них нарушают вызываемое прикосновением поведение. Ген unc-24 кодирует второй stomatin доменовый белок, который ко-локализуется с MEC-4 комплексом. Поскольку unc-24 мутации нарушают только реакции на прикосновение на сенсибилизированном генетическом фоне, то эта молекула участвует в, но не нужна для, восприятия прикосновения (Zhang et al., 2004).

Figure 4. A molecular model of touch—the MEC-4 complex. The MEC-4 complex of C. elegans body-touch neurons has been the focus of three decades of research. MEC-4 and MEC-10 are Deg/ENaC isoforms that serve as pore-forming subunits. Functional channels likely contain two MEC-4 subunits and one MEC-10 subunit (Hong and Driscoll, 1994; Jasti et al., 2007). MEC-2 and MEC-6 are accessory subunits that enable channel activity. MEC-2 is a stomatin-like protein located in the inner leaflet of the membrane, whereas MEC-6 is a paraoxonase-like transmembrane protein (Chelur et al., 2002). Mechanotransduction also requires a specialized extracellular matrix, consisting of MEC-5, a collagen isoform, and MEC-1 and MEC-9, both with multiple EGF repeats. MEC-7 and MEC-12 are tubulin monomers that form 15-protofilament microtubules required for touch sensitivity.

Хотя гетерологически экспрессируемые MEC-4 комплексы не обнаруживают чувствительности к силовому воздействию, чёткие доказательства указывают на то, что они обеспечивают нативные механотрансдукционные токи. Электрофизиология и получение прижизненных картин in vivo показывают, что мутации в mec-4, mec-6 и mec-2 устраняют трансдукцию без нарушения др. клеточных функций (Suzuki et al., 2003; O’Hagan et al., 2005). Более того, точковые мутации в mec-4 и mec-10 изменяют избирательнось к ионам нативных каналов (O’Hagan et al., 2005).
Каналы Deg/ENaC беспозвоночных необходимы для реакции на грубые прикосновения. У Drosophila, pickpocket экспрессируется в type II мультидендритных нейронах, которые служат в качестве болевых рецепторов (nociceptors) (Adams et al., 1998; Hwang et al., 2007). Нарушение экспрессии pickpocket нарушает поведение в ответ на грубые воздействия на тело (Zhong et al., 2010). Сходным образом, экспрессия mec-10 и degt-1 в мультидендритных нейронах C. elegans необходима для избегания грубых тычков (Chatzigeorgiou et al., 2010). Итак, эти находки указывают на то, что Deg/ENaC каналы участвуют в восприятии прикосновений у разных видов и модельностей.
Ряд mec-родственных молекул экспрессируется в DRG нейронах млекопитающих и их позитивная роль в рецепции прикосновений была исследована у нокаутных мышей (Fig. 3). Нарушение удаленного mec-2 родственного, stomatin-like protein-3 (SLP3), вызывает поведенческие дефициты в отношении дискриминации и потери механочувтствительности в субнаборе тактильных рецепторов мыши (Wetzel et al., 2007). Хотя эти SLP3-зависимые сенсорные нейроны ещё не идентифицированы, этот интригующий результат подчеркивает консервативность роли stomatin доменовых белков для прикосновений. Напротив, лишь легкие изменения в реакции на прикосновения обнаруживаются при нарушении изоформ DEG/ENaC млекопитающих, наз. acid-sensing ion channels (ASICs; кодируемых генами amiloride-sensitive cation channel [ACCN]; Price et al., 2000, 2001; Drew et al., 2004). Т.о., эти каналы могут модулировать скорее, чем преобразовывать механосенсорную информацию у млекопитающих (Fig. 3). Альтернативно, эти скромные фенотипы могут отражать избыточнойсть генной функции.

TRP channels.


TRP каналы являются др. классом катионовых каналов, участвующих в широком разнообразии физиологических процессов, включая многочисленные сенсорные виды ощущений (modalities). У C. elegans, TRP vanilloid (TRPV) изоформы osm-9 и ocr-2 экспрессируются в содержащих реснички механорецепторах, а их мутации нарушают избегание прикосновений к носу, повышенного осмотического давления и химических стимулов (Colbert et al., 1997; Tobin et al., 2002; Kahn-Kirby and Bargmann, 2006). Эти протеины колокализуются в сенсорных ресничках. Их расположение в ресничках взаимозависимо; , следовательно, эти изоформы, скорее всего, формируют гетеромеры. Предположена также роль osm-9’s ортологов TRPV4 млекопитающих в механотрансдукции; однако, нарушения TRPV4 оказывают лишь легкие эффекты на пороги касаний (Liedtke and Friedman, 2003; Suzuki et al., 2003). Интересно, что родственные TRPV изоформы у дрозофилы, nanchung (nan) и inactive (iav), небходимы для восприятия слуха, а не прикосновений (Kim et al., 2003; Gong et al., 2004).
PKD-2 является др. C. elegans TRP каналом, который локализуется в сенсорных ресничках (Barr et al., 2001). Этот канал экспрессируется в специфичных для самцов нейронах. Дефекты спаривания результат мутаций в этом гене и его партнере PKD-1 гомологе lov-1.
TRPN1, который кодируется геном no mechanorecptor potential C (nompC), стал первым кандидатом идентифицированным механотрансдукционным каналом у Drosophila. Мутантные мухи обнаруживают дефекты в касаниях, слухе и proprioception (Kernan et al., 1994; Walker et al., 2000). Поскольку эти мутанты обнаруживают тяжело сниженные механотрансдукционные токи в щетинках, то TRPN1 является прекрасным кандидатом на роль канала тактильной трансдукции (Walker et al., 2000). В соответствии с этой гипотезой, TRPN1 локализуется на дистальных кончиках сенсорных дендритов в хордотональных и щетиночных механорецепторах (Cheng et al., 2010; Lee et al., 2010). Этот канал также экспрессируется в субнаборе мультидендритных нейронов, которые могут действовать проприоцепторы (Cheng et al., 2010). В замечательной параллели, C. elegans ортолог TRPN1, TRP-4, экспрессируется в предполагаемых проприоцепторах и в снабженных ресничками механосенсорных нейронах , участвующих в поведении поиска пищи (Li et al., 2006). Недавнее исследование продемонстрировало, что механотрансдукционные токи в этих реснитчатых нейронах нужаются в функциональных TRP-4. Более того, мутации поры TRP-4 меняют биофизические свойства нативных трансдукционных токов. Эти находки строго подтверждают мнение, что TRPN1 является механосенсорным трансдукционным каналом у беспозвоночных. Млекопитающие имеют, по-видимому, адаптированную отличающуюся молекулярную стратегию для тактильной трансдукции: TRPN1 гомологи экспрессируются в механосенсорных клетках у C. elegans, рвбок данио и амфибий, но не обнаружены в геномах млекопитающих (Walker et al., 2000; Sidi et al., 2003; Shin et al., 2005; Li et al., 2006).
TRPA изоформы также участвуют в тактильной рецепции. Напр., у Drosophila painless необходим для поведенческой реакции на грубые тычки и пагубную жару (Tracey et al., 2003). C. elegans мутанты trpa-1 обнаруживают дефекты в поведении nose-touch и поиска пищи (Kindt et al., 2007). TRPA1 млекопитающих, скорее всего, модулирует чувствительность чувствительных к прикосновению болевых рецепторов во время воспаления (Fig. 3; Lumpkin and Caterina, 2007; Kwan et al., 2009).

Touch-evoked currents in cultured DRG neurons.


Хотя молекулярные характеристики каналов механотрансдукции у млекопитающих остаются загадочными, вызываеме прикосновениями токи были изучены в культивируемых DRG нейронах (McCarter et al., 1999). В субнаборах DRG нейронов эти токи обнаруживали различную ионную избирательность, это указывает на то, что они переносятся дискретными изоформами ионных каналов (Drew et al., 2002; Hu and Lewin, 2006; Rugiero et al., 2010). Подобно тактильным рецепторам in vivo, культивируемые DRG нейроны обнаруживают разные профили адаптации (Rugiero et al., 2010). В отличие от волосковых клеток, адаптация в культивируемых DRG нейронах не зависит от Ca2+. Итак. эти исследования указывают на то, что механотрансдукция в клетках млекопитающих обеспечивается с помощью разных молекулярных механизмов. В недавнем исследовании был идентифицирован новый класс ионных каналов, семейство piezo, которое необходимо для вызываемых прикосновениями токов в культивируемых DRG нейронах (Coste et al., 2010). Как эти вызываемые касаниями реакции in vitroсвязаны с механотрансдукцией in vivo это важный, нерешенный вопрос.

Additional ion channels shape touch sensitivity.


Сигнальные пути, стоящие ниже трансдукции, управляют чувствительностью к прикосновениям путем изменения возбудимости мембраны (Fig. 3; Foulkes and Wood, 2008). Мутации потери функции в SCN9A, который кодирует NaV1.7, специфичный для болевых рецепторов активируемый эл. напряжением Na+ канал, вызывают драматическую потерю чувствительности к болевым стимулам у людей и мышей (Nassar et al., 2004; Cox et al., 2006). Напротив. мутации с избыточной функцией в этом гене ведут сверхчувствительности к боли. Повышенная чувствительность к прикосновениям наблюдалась у мышей, лишенных K+ каналов с двумя порами, которые обеспечивают мембранные потенциалы покоя (Noel et al., 2009). Родственные с двумя порами K+ каналы, как предполагают, являются молекулярными мишенями для sanshool, соединения, обнаруженного у Schezuan peppercorns, которое активирует тактильные рецепторы и индуцирует ощущения покалывания у людей (Lennertz et al., 2010). Хотя предприняты активные усилия на идентификации механотрансдукционных каналов у млекопитающих, эти исследования подчеркивают возможность того. что др. сенсорные молекулы могут быть мишенями для терапевтических вмешательств.

Handling stress with cytoskeletal support


Подобно волосковым клеткам большинство тактильных рецепторов обладают явными цитоскелетными специализациями. У беспозвоночных эти специализации базируются на микротрубочках. Модифицированные реснички служат в качестве сенсорных дендритов в Drosophila типа I механосенсорных нейронах, также как и у C. elegans nose-touch и специфичные для самцов нейроны (Goodman, 2006; Kernan, 2007). Т.о., сенсорные дефекты, возникают в результате мутаций в генах, которые нарушают генез ресничек, транспорта внутри ресничек или локализацию белков ресничек (Perkins et al., 1986; Kernan, 2007; Bae et al., 2008). Хотя у C. elegans body-touch рецепторные нейроны лишены сенсорных ресничек, их механочувствительные отростки заполнены в высшей степени поперечно связанными, 15-protofilament микротрубочками (Fig. 4; Chalfie and Thomson, 1979, 1982).
Анализ двух mec генов демонстрирует, что эти уникальные структуры существенны для касанием вызываемого поведения. Mec-12 и mec-7 кодируют α- и β-tubulins? которые формируют 15-protofilament микротрубочки (Savage et al., 1989; Fukushige et al., 1999). Эти гены экспрессируются на высоком уровне в тактильных рецепторных нейронах, это согласуется с наблюдением, что 15-protofilament микротрубочки являются эксклюзивными для этих клеток (Chalfie and Sulston, 1981; Chalfie and Thomson, 1982; Hamelin et al., 1992; Fukushige et al., 1999). Многие mec-7 и mec-12 мутантные аллели вызывают замещение 15-protofilament микротрубочек типичными микротрубочками (Chalfie and Thomson, 1982). Мутации в этих двух генах также вызывают нечувствительность к касаниям у червей (Chalfie and Sulston, 1981; Chalfie and Au, 1989). Базируясь на этих генетических доказательствах, ранние модели предполагали, что соединение между MEC-4 комплексом, цитоскелетом и внеклеточным матриксом необходимо для механотрансдукции (Gu et al., 1996).
Недавние физиологические и структурные данные показали. что эта модель д. быть пересмотрена (Fig. 4). Важно. что трансдукционные токи ослабляются. но не исчезают при mec-7 и mec-12 мутациях. Эти данные демонстрируют, что 15-protofilament микротрубочки, хотя и необходимы для вызываемого касанием поведения, не нужны для активации трансдукционных каналов (O’Hagan et al., 2005; Bounoutas et al., 2009). Более того, функциональные MEC-4 комплексы вряд ли соединяются с микротрубочками, поскольку плотности точек MEC-4 и juxtamembrane микротрубочек не коррелируют и эти структуры не колокализуются на плазматической мембране (Emtage et al., 2004; Cueva et al., 2007). Вместо этого пучки микротрубочек соединены с плазматической мембраной в месте, оличном от MEC-4 точек. Одним из кандидатов на эти связи является Echinoderm microtubule-associated protein-like protein-1 (ELP-1), который экспрессируется в клетках, которые прилипают к кутикуле, включая body-touch рецепторные нейроны, nose-touch нейроны и специфичные для самцов нейроны (Hueston et al., 2008). Так, разрушение elp-1 нарушает тактильную чувствительность.
Все эти находки указывают на то, что цитоскелет влияетт на чувствительность к силовому воздействию без непосредственного прикрепления его к MEC-4 комплексу. Альтернативная модель постулирует, что MEC-4 комплекс являются каналом, активируемым растяжением, и что пучки микротрубочек косвенно участвуют в пропускной способности за счет изменения мембранных сил во время активации или адаптации канала (Cueva et al., 2007; Bounoutas et al., 2009).
Вместе со структурной ролью в восприятии силы, микротрубочки дикого типа необходимы для собственно для доставки белков механотрансдукции. Сильные мутации потери функции в mec-7 и mec-12 нарушают общий уровень белков и распределение точек MEC-4 (Emtage et al., 2004; Bounoutas et al., 2009). Хотя трансдукционные каналы д. проникать в плазматическую мембрану, чтобы активировать нейроны, иммуноэлектронная микроскопия указывает на то, что примерно половина MEC-4 комплексов связана с внутриклеточными микротрубочкаи в отсутствии связанных с мембраной пузырьков (Cueva et al., 2007). Это интригующее наблюдение указывает на то, что мембранные белки могут доставляться вдоль микротрубочек посредством транспорта без пузырьков в тактильные рецепторные нейроны.
По сравнению с волосковыми клетками и тактильными рецепторами C. elegans , мало известно о роли цитоскелета в рецепции прикосновений у позвоночных. Одно исследование культивируемых DRG нейронов показало, что cytochalasin B, который ингибирует полимеризацию актина, ослабляет механочувствительные токи (Drew et al., 2002). Осуществляется ли этот эффект посредством альтераций кортикального цитоскелета или базирующихся на микрофиламентах специализаций, неясно. Фактически цитоскелетные специализации ещё не описаны в соматосенсорных афферентных волокнах млекопитающих.
Напротив, клетки Merkel обладают заметными микроворсинками, которые связаны с покрывающими их эпидермальными клетками с помощью электрон-плотных филамент (Toyoshima et al., 1998). Интересно, что эти отростки богаты espin, актин-связывающим белком, обнаруженным в стереоцилиях волосковых клеток и др. сенсорными микроворсинками (Sekerkova et al., 2004). Исходя из их структурного сходства со стереоцилиями, микроволоски Merkel клеток, ка полагают, являются местами механотрансдукции (Iggo and Findlater, 1984); однако, функциональное подтверждение данной модели отсутствует.

Grasping the role of the matrix


Сили, проявляющиеся между клетками метазоа и ВКМ играют фундаментальную роль в развитии и функции сложных тканей (rev. Ingber, 2006). Разные ткани экспрессируют многочисленные компоненты ВКМ и их рецепторы, в большинстве естественно интегрины. Способность клетки отвечать соответственно на окружение своего локального матрикса существенно для клеточной миграции, дифференцировки и жизнеспособности (rev. Legate et al., 2009).
Важность белков ВКМ для тактильной чувствительности лучше всего показана на тактильных рецепторных нейронах у C. elegans. Их механочувствительные нейриты проникают в электрон-плотный ВКМ и окружаются эпидермальными клетками, которые прикреплены к кутикуле с помощью периодических структур, подобных полудесмосомам (Emtage et al., 2004). В этих нейронах тактильная чувствительность неждается в специализированных компонента DRV? а такэе в передаче сигналов integrin (Calixto et al., 2010).
Три mec гена кодируют важные компоненты ВКМ (Fig. 4; Chalfie and Sulston, 1981; Du et al., 1996). Тактильные рецепторные нейроны экспрессируют MEC-1 и MEC-9, которые являются секретируемыми белками, содержащими множественные epidermal growth factor (EGF)–подобные домены и Kunitz-подобные повторы (Du et al., 1996; Emtage et al., 2004). Уникальный коллаген, кодируемый с помощью mec-5, продуцируется соседними эпидермальными клетками (Du et al., 1996). Интересно, что эти белки распределены в точках, которые перекрываются с MEC-4 комплексами (Emtage et al., 2004). Мутации в этих генах компонентов матрикса нарушают субклеточное распределение MEC-4 комплексов. Напротив, точечная локализация компонентов ВКМ не меняется mec-4 мутациями. Итак, эти данные указывают на то, что ВКМ собственно локализует трансдукционные каналы. Базируясь на неполной колокализации MEC-5 и MEC-4 комплексов на ультраструктрном уровне, Cueva et al. (2007) утверждают, что MEC-5 вряд ли действует как крепление воротной пружины (gating tether). Играют ли integrins или др. связывающие белки непосредственную роль в активации каналов трансдукции, предстоит определить.
У Drosophila type I сенсорные органы, соединения между механосенсорными дендритами и кутикулой существенны для трансдукции (Kernan, 2007). Как и у C. elegans, механосенсорные отростки окружены поддерживающими клетками, которые секретируют электрон-плотный ВКМ, наз. дендритными ножнами или шапочкой (Fig. 2 C). Один из компонентов этого матриксакодируется геном NompA (Chung et al., 2001). По поведению, NompA мутантны не чувствительны к прикосновению и глухи. Они также лишены реакций щетиночных механорецепторов (Kernan et al., 1994).
Три линии доказательств указывают на то, что NompA является структурным элементом дендритной шапочки (Chung et al., 2001). Во-первых, NompA мутанты имеют дезорганизованные дендритные шапочки и обособленные механосенсорные дендриты. Во-вторых, NompA включает крупный, секретируемый домен, который локализуется в шапочке. В-третьих, этот регион содержит zona pellucida домен, который обычно обнаруживается в белках ВКМ. Заслуживает внимания параллель, zona pellucida доменовые белки, наз. tectorins являются главными компонентами текториальной мембрfаы, которая существенна для механической стимуляции волосковых клеток улитки (Killick et al., 1995). Поскоьку прикрепление дендритов нарушено у мутантов NompA , то ясно, что NompA, подобно tectorins, играет ключевую структурную роль в механотрансдукции. Участвует ли он непосредственно в воротном механизме трансдукционного канала, неясно.
Хотя важность ВКМ для развития соматосенсорных нейронов у млекопитающих давно установлена, но возможная роль в сенсорной трансдукции только начинает проясняться. В DRG нейронах взаимодействия между специфическими интегринами и ВКМ способствуют вытягиванию нейритов во время развития и при регенерации, вызванной повреждением (Tomaselli et al., 1993; Andrews et al., 2009). Недавнее исследование выявило молекулярно отличающиеся внеклеточные контакты в тактильных рецепторах млекопитающих (Hu et al., 2010). В DRG нейронах in vitro, Hu et al. (2010)наблюдали, что чувствительные к прикосновениям нейриты связаны с laminin субстратами посредством 100-nm белковых филамент. Это напоминает пионерское исследование, которое выявило чувствительность к Ca2+ кончиковых связок волосковых клеток (Assad et al., 1991), был тестирован набор воздействий, чтобы определить те, которые разрушают 100-nm филаменты и устраняют механочувствительность в предполагаемых рецепторах лекких прикосновений. Эти филаменты оказались чувствительны к furin протеазам, но устойчивы к воздействиям, которые нарушали integrins, cadherins и glycosyl phosphatidylinositol-закрепленные белки. Этот уникальный профиль чувствительности показывает, что 100-nm крепления отличаются от интегринов, а также от базирующихся на cadherin кончиковых связках в волосковых клетках. Определение молекулярных характеристик этих соединительных белков и определение их роли в механотрансдукции будет следующей ствпенью.

Sensational epidermal cells


Хотя механические свойства эпидермиса являются ключевыми для передачи силовых воздействий от поверхности кожи к тактильным рецепторам, несколько линий доказательств указывают на то, что эпидермальные клетки играют не только структурную роль. Для C. elegans тактильных рецепторных нейронов структурное прикрепление к кутикуле не нужно для тактильной чувствительности, что демонстрируется чувствительностью к прикосновениям у him-4 мутантов, лишенных полудесмосомных соединений с кутикулой (Vogel and Hedgecock, 2001). Вместо этого эпидермис секретирует важные молекуля ВКМ, которые, как полагают, позиционируют комплексы трансдукционных каналов в сенсорных нейронах (Emtage et al., 2004).
Эпидермальные клетки млекопитающих идеально подходят для участия в передаче соматосенсорных сигналов (Lumpkin and Caterina, 2007). Эпидермис иннервируется сенсорными афферентными волокнами, которые преобразуют пагубные механические стимулы (Zylka et al., 2005; Cavanaugh et al., 2009) с помощью комплексов Merkel клетка-нейриты (Johnson, 2001). Кератиноциты, которые являются принципиальными клетками эпидермиса, Merkel клетки и ламеллы Pacinian телец экспрессируют нейротрансмиттеры, которые обладают потенциалом, чтобы настраивать тактильную чувствительность афферентных волокон (Halata et al., 2003; Lumpkin and Caterina, 2007; Pawson et al., 2009). Хотя кератиноциты и сенсорные афферентные волокна не образуют синапсов, их близость делает возможной быструю паракринную передачу сигналов.
Важно, что эпидермальные клетки млекопитающих экспрессируют сенсорные ионные каналы, участвующие в механотрансдукции, такие как TRPV4 и TRPA1 (Liedtke et al., 2000; Lee and Caterina, 2005; Kwan et al., 2009). Механически вызываемые свойства возбуждения рецепторов легких прикосновений, изменяюobtcz у TRPA1 нокаутных мышей, привели Kwan et al. (2009) к предположению, что TRPA1 влияет на тактильную чувствительность посредством модулирующей роли в кератиноцитах. Эта модель может быть протестирована с помощью ткане-специфических нокаутов.
В 1875, Merkel утверждал, что названные в его честь (eponymous) клетки действуют как тактильные рецепторы и несколько линий доказательств подтвердили это мнение (Merkel, 1875). Клетки Merkel образуют синаптические контакты с сенсорными нейронами, экспрессируют многочисленные пресинаптические белки и являются прирожденно чувствительными к силовым воздействиям in vitro (Haeberle et al., 2004, 2008; Lumpkin and Caterina, 2007; Boulais et al., 2009). Более того, клетки Merkel необходимы для вызываемых прикосновениями SAI реакций (Maricich et al., 2009). У Atoh1 нокаутных мышей клетки Merkel неспособны развиваться, но SAI сенсорные афферентные волокна всё ещё иннервируют свои собственные рецептивные поля. Электрофизиологический анализ этих мышей выявил полную потерю SAI реакций в отсутствие клеток Merkel (Maricich et al., 2009). Как и предполагалось, рецепторы легких прикосновений, которые иннервируют др. концевые органы, обнаруживают нормальную механочувствительность, демонстрируя, что Atoh1 избирательно необходим для тактильных реакций в комплексах Merkel клетка-нейрит. Эффекты постнатальной потери клеток Merkel менее ясны. Некоторые исследования сообщают, что потеря клеток Merkel нарушает SAI реакции (Ikeda et al., 1994; Senok et al., 1996), тогда как др. обнаружили незначительное влияние на реакции с медленной адаптацией (Mearow and Diamond, 1988; Mills and Diamond, 1995; Kinkelin et al., 1999). Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить обусловлено ли это расхождение методологическими отличиями. Альтернативно, клетки Merkelмогут быть необходимы для собственно развития, а не для поддержания функциональными SAI афферентные волокна.
Др. ключевой вопрос являются ли синапсы клеток Merkel возбуждающими или они высвобождают нейромодуляторы, которые настраивают чувствительность тактильных рецепторов афферентных волокон. Функциональные исследования, которые блокировали синаптическую передачу, привлели к конфликтующим моделям (Fagan and Cahusac, 2001; Halata et al., 2003; Cahusac et al., 2005; Cahusac and Senok, 2006; Cahusac and Mavulati, 2009). Неожиданно, иммуноокрашивание локализовало некоторые рецепторы нейротрансмиттеров на клетках Merkel скорее, чем на их SAI афферентных окончаниях (Beiras-Fernandez et al., 2004; Cahusac et al., 2005; Tachibana and Nawa, 2005; Tachibana et al., 2005). Эти находки указывают на то, нейротрансмиттеры могут действовать на сами клетки Merkel. Т.о., роль клеток Merkel в тактильной рецепции всё ещё предстоит определить.

What we do and don’t know


Прикосновение является сложным ощущением, охватывающим разные модельности, и мы только начинаем понимать намеки на клеточные принципы.
Во-первых, передача механосенсорных сигналов базируется на специализированных клеточных структурах. Среди видов беспозвоночных и позвоночных пагубные прикосновения преобразуются свободными нервными окончаниями. Напротив, рецепторы легких прикосновений обладают целым рядом морфологически сложных концевых органов. Это в основном базирующиеся на микротрубочках нейроны беспозвоночных. Выяснение роли цитоскелетных белков в тактильной чсувствительности позвоночных ждет дальнейших исследований.
Во-вторых, тканевая механика и несенсорные клетки придают форму реакции на механические стимулы. Недавние исследования предположили, что острота тактильной чувствительности у человека зависит отмеханических свойств кожи, таких как размер кончиков пальцев, жесткость эпидермиса и пространственного расположения гребней дактилоскопических узоров пальцев (Gerling and Thomas, 2008; Peters et al., 2009; Scheibert et al., 2009). Для большинства рецепторов легких прикосновений созданы дополнительные структуры, управляющие настройкой и чувствительностью. Эпидермальные клетки создают структурные крепления, секретируют специализированные компоненты ВКМ и могут влиять на вызываемые прикосновением реакции путем высвобождения нейроактивных компонентов. Отсается открытым вопрос, действительно ли клетки Merkel и кератиноциты преобразуют механические стимулы или они играют модулирующую роль.
В-третьих, возбуждающие ионные каналы являются центральными для тактильной рецепции. Все из механотрансдукционных каналов беспозвоночных, идентифицированные посредством беспристрастного генетического скрининга распадаются на семейства Deg/ENaC и TRP каналов. Понимание механизмов их открывания силовым воздействием нуждается в биофизической информации, такой как высокого разрешения белковые структуры. У позвоночных механосенсорные клетки выявляют картину, показывающую, что молекулярные детали трансдукции отличаются существенно. Интенсивные исследования Deg/ENaC и TRP каналов млекопитающих оказались неспособными продемонстрировать фундаментальную роль этих каналов в механотрансдукции кожи, хотя они модулируют тактильную чувствительность. Сдабые тактильные дефициты у нокаутных мышей могут отражать генетическую избыточность трансдукционных каналов, функциональное перекрывание тактильных рецепторных клеток, которые используют разные механизмы трансдукции или вовлечение новых ионных каналов, таких как семейство piezo. Чтобы сделать развличия между этими возможностями, необходима техника, используемая в учебниках по беспозвоночным, включая селективные маркеры для разных тактильных рецепторов, пригодные походы для записи трансдукционных токов, новаторские поведенческие подходы для тактильной дискриминации и беспристрастный молекулярный скрининг у млекопитающих и рыбок данио (Granato et al., 1996; Ribera and Nusslein-Volhard, 1998; Low et al., 2010).
Сайт создан в системе uCoz