Множественный склероз является основной причиной погрессивной, нетравматической нейрологической неспособности у молодых людей западных стран. Патофизиологические события, приводящие к этому состоянию, по-видимому, разнообразны и его этиология остаётся неизвестной. В основном мнрожественный склероз определяется как аутоимунная реакция, направленная против ЦНС, возможно на ассоциированные с миэлином антигены, приводя к повторяющимся воспалительным процессам, устранению миэлина и повреждениям нервов [1]. В результате клиническая картина множественного склероза варьирует от пациента к пациенту с разными клиническими подтипами (relapsing remitting multiple sclerosis (RRMS); secondary progressive multiple sclerosis (SPMS); primary progressive multiple sclerosis (PPMS) и клинически изолированный синдром, ассоциированный с большим спектром неспецифических симптомов, индивидуальным клиническим течением и варьтирующей реакцией на лечение. Поэтому правильная диагностика множественного склероза затруднена и базируется на клинической оценке комбинированных подходов, таких как neuroimaging (получение изображений с помощью магнитного резонанса ), определение в спинномозговой жидкости (CSF) IgG олигоклональных дисков (OCBs) определение зрительного и моторной деятельностю вызываемого потенциала [2-4].
Использование биомаркеров, как полагают, может помочь врачам в постановке раннего и аккуратного диагноза множественного склероза [5]. Кровь, CSF, и моча в основном используются для идентификации и подтверждения новых белковых биомаркеров множественного склероза. Однако ни одна из них не дает достаточно прочного результата [5-8]. В отличие от этих биологических жидкостей, жидкость слёз исследуется редко и обычно в этих немногочисленных исследованиях обнаруживается присутствие OCBs в слезах в 50-75% случаев [9, 10]. Мы преположили, что белковое содержимое слёз может быть модифицировано в ответ на множественный склероз и может быть информативным для определения статуса пациентов. Поэтому мы предприняли количественное исследование протеома, используя tandem mass tag (TMT), с помощью которого сравнивали слёзы от пациентов с множественным склерозом и контрольных пациентов для выявления потенциально новых белков слёз для диагностики множественного склероза. Потенциальные кандидаты затем оценивались с помощью независимых, ортогональных подходов (Western blot and immunoassay).
30 пациентов с множественным склерозом (20% мужчин) были исследованы в Geneva University Hospitals (средний возраст ± SD [years]: 42.4 ± 15.9). Также были исследованы 25 контрольных пациентов (32% мужчины) (средний возраст ± SD [years]: 42.7±15.1). От каждого пациента собирали слезы, CSF или кровь. Три независимых количественных (tandem mass tag) экспериментов было проведено. Определение белка осуществляли с помощью Western blot на слезах и CSF и с помощью ELISA в выборках сыворотки крови.
Комбюинированный протеомный анализ позволил идентифицировать 185 белков в слезах. Среди отличительных белков alpha-1 antichymotrypsin был единственным достоверно увеличивающимся в трех экспериментах в сходных соотношениях (rсоотношения от 1.6 до 2.5, p < 0.05). Его увеличение в слезах, CSF и сыворотке было в дальнейшем подтвеждено с помощью Western blot и ELISA, соотв.
Данное исследование подтвердило концепцию, что модификации протеома слёз могут отражать биологические аномалии, ассоциированные со множественным склерозом и и вообще-то с др. воспалительными состояниями, затрагивающими ЦНС. Кроме того, подъём alpha-1 antichymotrypsin в слезах выступает как многообещающий биомаркер для диагноза множественного склероза.
