Jessica Nasica-Labouze, Phuong H. Nguyen, Fabio Sterpone et al. Amyloid β Protein and Alzheimer’s Disease: When Computer Simulations Complement Experimental Studies Chem. Rev., 2015, 115 (9), pp 3518–3563

Взаимодействия Aβ с ингибиторами Отрицательные результаты недавней фазы III клинических испытаний двух нацеленных на Aβ моноклональных антител, bapineuzumab и solanezumab, летом 2012 указали на необходимость пересмотра принципов терапии AD.42,409 Установлено, что гомодимерный белок из 58 остатков, Z_Aβ3, соединяется с Aβ1-40 мономером и ингибирует процесс образования фибрилл. Структура комплекса Z_Aβ3-Aβ1-40, выявляемая с помощью NMR раствора показала, что Aβ1-40 располагается в β-шпилечной конформации, затрагивающей остатки 17-36, тогда как остальные аминокислоты неупорядоченны и края Aβ1-40 β-слоёв закрыты двумя β-нитями Z_Aβ3 и тем самым блокируют расширение β-слоя Aβ1-40.¹¹⁴ Сходным образом reelin, белок внеклеточного матрикса, стабилизирует Aβ1-42 олигомеры, приводя к снижению токсичности и задержке образования фибрилл. 410 Серия N-метилированных пептидов или пептидов с D-аминокислотой оказалась способной подавлять образование Aβ амилоида, воздействуя или на остатки Aβ 32-37⁴¹¹ или остатки Aβ 16-21 (SEN304; ref 412). Так, SEN304 соединяется с Aβ1-42 мономерами и олигомерами, чтобы помочь образованию нетоксичных агрегатов. При концентрации 100 nM, SEN304 способен почти полностью устранять подавление LTP, вызываемое с помощью 1 µM Aβ1-42 в срезах гиппокампа.⁴¹² Недавно два ингибитора с чередующимися D- и L-аминокислотами длиной 21 и 23 имели все свои группы пептидов ориентированными в том же самом направлении, которое, как известно, снижает агрегацию Aβ1-42 и токсичность в молярном соотношении, по крайней мере, 10:1.⁴¹³ Малые молекулы, как потенциальные кандидаты на роль лекарств против AD исследуются интенсивно в последние годы. Благодаря отличиям в размере, геометрии и химических свойствах эти соединения в целом обнаруживают ингибирующие эффекты тремя способами. Во-первых, соединения могут связывать фибриллы и снижать токсичность, ограничивая фрагментацию фибрилл. В недавнем исследовании несколько соединений, включая BAF31, как было установлено, снижают цитотоксичность Aβ1-42 в клетках млекопитающих до 90%.^9b Эти соединения повышают стабильность фибрилл, ограничивая их фрагментацию скорее, чем снижая образование фибрилл. Эти соединения не соединялись с олигомерами. Во-вторых, соединения могут ускорять образование фибрилл и снижать время жизни токсичных олигомеров. Напр., orcein-related polyphenol, O4 (Figure 14) непосредственно соединяется с олигомерами и способствует превращению их в крупные амилоидные фибриллы, при этом O4 взаимодействует с гидрофобными остатками Aβ1-42.⁴¹⁴ Третий способ, когда малые молекулы взаимодействуют с олигомерами, препятствуя образованию фибрилл. Возникающие комплексы, как полагают off-pathway и нетоксичны. Несколько полифенолов описано, которые ослабляют AD этим способом. ε-Viniferin glucoside (EVG; Figure 14) является одним из полифенолов, который ингибирует образование фибрилл в Aβ25-35, Aβ1-40 и Aβ1-42 и защищает PC12 клетки от гибели, вызываемой этими пептидами.⁴¹⁵ Установлено, что EVG вызывает образование поворотов в 10-12 и 28-30 регионах Aβ. Подтверждено, что EVG преимущественно взаимодействует со щелью, образуемой Y10, V12, Q15 и F19 или K28, G29, A30 и I31.⁴¹⁶ Др. полифенол epigallocatechin gallate (EGCG; Figure 14) обнаруживает эффекты, сходные с таковыми у EVG. EGCG в данное время находится в фазе 2-3 клинических испытаний против ранних стадий болезни Алцеймера (NCT00951834), которое закончится в июне 2015. EGCG, как было установлено, перенаправлять путь агрегации Aβ и генерирует off-pathway нетоксических олигомеров, неспособных к амилоидному фибриллогенезу.⁴¹⁷ EGCG может также ремоделировать зрелые Aβфибриллы в нетоксические олигомеры,⁴¹⁸ подтверждая его терапевтический потенциал в лечении AD пациентов. Показано, что EGCG в основном взаимодействует с Aβ остатками 1-16 посредством образования водородных связей и остатками 17-42 посредством гидрофобных взаимодействий.^419,420 Помимо полифенолов, не полифенольные молекулы также могут ингибироват образование Aβ фибрилл за счет связывания олигомеров. Carnosine (β-alanyl-L-histidine; Figure 14), естественно возникший дипептид соединяется с Aβ и ингибирует образование фибрилл. Показано, что carnosine образует временные солевые мостики с заряженными остатками в Aβ (R5, K16 и K28) и гидрофобные контакты с CHC (central hydrophobic cluster). ⁴²³ Недавно аутооксидация полифенолов,(+)-taxifolin,⁴²⁴ и EGCG⁴²⁵ в производные quinone была описана как важная реакция. Выявлен потенциал производных quinone как ингибиторов агрегации Aβ. В самом деле, quinones и производные quinone ингибируют агрегацию амилоида.^426-428 В 2010, Scherzer-Attali et al. обнаружили, что производные quinone, NQTrp (1,4-naphthoquinon-2-yl-L-tryptophan; Figure 14), способен ингибировать образование фибрилл Aβ1-42 и вызывать полное восстановление фенотипа у трансгенной модели AD Drosophila.⁴²⁹ Показано, что NQTrp молекулы являются наилучшим из лигандов Aβ17-42 тримерных структур среди 5 лекарст в виде малых молекул, включая полифенолы.²⁰⁸

Укороченные варианты Aβ и патогенетические и защитные мутации Aβ

Семейные формы болезни (FAD) Алцгеймера составлют лишь небольшую долю от всех случаев AD и обнаруживают аутосомно доминантный паттерн наследования, который приводит к раннему появлению симптомов (в целом между 40 и 65 годами). FAD мутации возникают в генах presenilin PSEN1 и PSEN2, а такжен в гене для APP, из которого возникает Aβ. Свыше 30 мутаций в гене APP известны на сегодня, 25 из них являются патогенными и аутосомно доминантными с ранним началом болезнями и 2 из них описаны как мутации, защищающие от AD.⁴⁴⁰ Наблюдаются 4 типа FAD генетических аберраций в гене APP: полное удвоение гена, одиночные точковые missense замены, и делеции или инсерции нуклеотидов. Генные дупликации вызывают избыточную экспрессию APP, которая неминуемо приводит к избыточной продукции Aβ⁴⁴¹ и ко всей последующей сопровождающей её токсичности. Некоторые мутации возникают вблизи APP-Aβ, сайтов с помощью секретаз β и γ расщепления, которые обычной приводят к избыточной продукции Aβ^442,443 или сдвигают относительные количества Aβ1-40 и Aβ1-42 в направлении более высокой продукции более токсичных Aβ1-42. Предполагается, что передача сигналов Rho–Rock модулирует специфичность расщепления с помощью γ-secretase, и что NSAIDs (nonsteroidal anti-inflammatory drugs) влияют на расщепляющую активность γ-secretase через их взаимодействие с Rho (Zhou, Y. et al. Nonsteroidal anti-inflammatory drugs can lower amyloidogenic Aβ₄₂ by inhibiting Rho. Science 302, 1215–1217, 2003). Многие патогенные FAD мутации увеличивают склонность Aβ агрегировать in vitro.^442,443 В особенности, мутации, расположенные в или близи CHC, Flemish (A21G), Dutch (E22Q), Italian(E22K), Arctic (E22G) и Iowa (D23N) мутации, которые также увеличивают токсичность, вызываемую Aβ. Из-за своей тесной близости к сайту α-расщепления (K16-L17), некоторые из этих мутаций были описаны как снижающие генерацию не-амилоидных продуктов и повышающих уровни мутантных Aβ, резистентные к энзиму деградации Aβ neprilysin.⁴⁴⁴ Teplow et al. охарактеризовали роль различных остатков и сообщили, что Aβ1-40 наиболее чувствителен к мутациям в позициях 22 и 23, таким как E22G и D23N, тогда как Aβ 1-42 наиболее подвержен A21G.¹⁵⁰ Было показано, что A21G снижает элонгацию фибрилл и способствует формированию протофибрилл и токсических олигомеров, тогда как E22G увеличивает количество образования протофибрилл. Эффекты FAD мутаций A21G и E22G были также изучены с использованием IM-MS, показавшим, что распределения ранних олигомеров отличается у каждого из мутантов и у Aβ аллоформ.⁵³ Др. патогенная FAD мутация это Osaka E22Δ, которая состоит из делеции остатка 22. E22Δ , как известно, вызывает холестеролом обеспечиваемую токсичность, поскольку мутация модулирует уровни внутриклеточных и внеклеточных Aβ, секреция которых обычно регулируется утечкой холестерола.⁴⁴⁵ Мутация de novo D23Y и замены пролина в CHC, как было установлено, затрагивает самосборку и токсичность.^139,446 Эксперименты также подчеркнули важность N-терминальных остатков 1-16,50,53-55,^444,447, чья роль была занижена в последнее время из-за их чрезвычайно дезорганизованной струкуры в синтетических Aβ фибриллах. сюда входят FAD H6R (English), D7H (Taiwanese) и D7N (Tottori) мутации. В частности, D7N ускоряет кинетику перехода в конфигурации, богатые β-слоями, и способствует раннему образованию олигомеров высокго порядка с более α/β структурами, которые значительно более токсичны по сравнению с WT Aβ1-40 и Aβ1-42.^149a Также было показано, что FAD D7N мутация приводит к раннему распределению олигомеров, которое отличается такового Aβ1-40 и β1-42.⁵³ Двойная замена D1E/A2V также затрагивает фибриллогенез Aβ1-40 и преимущественно формирует нейротоксические агрегаты.⁴⁴⁸ Наконец, FAD мутация, K16N, выявленная в одной семье, обнаруживает увеличение продукции Aβ из-за бедности субстрата для α-секретазы. Мутантный K16N Aβ сам по себе не является вредным, но становится токсичным, если смешивается в эквимолярном соотношении с WT Aβ, ингибируя образование фибрилл WT Aβ1-42 и продуцируя больше Aβ олигомеров.⁴⁴⁴ Во многих случаях описываются ключевые взаимодействия боковых цепочек как источник токсичности Aβ. На базе модели фибриллы Aβ1-42,²⁹ мутация K16N предположительно добавляет водородный мостик между боковыми цепочками K16 и N16 в гетеротетрамерах, увеличивая тем самым стабильность агрегатов.⁴⁴⁴ Важность остатков лизина в Aβ была подчеркнута Sinha et al., которые тщательно проанализировали K16A и K28A мутантов.^151a K16, как известно, важен для прохождения фибриллогенеза, тогда как K28, как полагают, стабилизирует петлю управления упаковки Aβ. Они установили, что каждая мутация с помощью аланина оказывает выраженные эффекты на сборку Aβ и драматически снижает токсичность Aβ, указывая на возможность разработки ингибиторов, нацеленных на K16 и K28. Др. пример представлен FAD D23N мутацией, которая путем предупреждения образования соляных мостиков с K28, также модифицирует токсичность. Наконец, English мутация, путем добавления одного заряженного остатка и Taiwanese и Tottori мутации, путем делеции одного заряженного остатка, также, скорее всего, изменяют сеть и популяции всех соляных мостиков. Неожиданно, отсутствует токсичность FAD мутаций, описанных в C-терминальном регионе (остатки 30-42), хотя высокий процент Aβ с Met-sulfoxide в позиции 35 присутствует в головном мозге при AD,⁴⁴⁹, но de novo Aβ G33A и GI33 варианты, как было установлено, способствуют процессу агрегации in vitro за счет увеличения популяции крупных олигомеров (16-20-mers) за счет малых олигомеров (2-4-mers). Однако, как они влияют на структуру рано сформированных Aβ1-42 олигомеров, остается открытым вопросом.⁴⁵⁰ На базе экспериментов in vitro и in vivo олигомеры Aβ1-42 с заменами G33 на аланин и изолейцин оказались значительно более токсичными, чем WT Aβ1-42, подтверждая, что G33 может представлять собой критический остаток, связанный с токсичностью и олигомеризацией. ⁴⁵⁰ Усиление склонности к агрегации Aβ1-40 было подтверждено у двойных de novo мутантов G33V/V40A и I31L/M35L,⁴⁵¹ , а исследование Hecht et al. продемонстрировало, что специфические неполярные боковые цепочки в C-терминальной половине Aβ1-42 не нужны для агрегации и амилоидогенеза.⁴⁵² Помимо Aβ1-40 и Aβ1-42, укороченные Aβ4-42 и Aβ5-42,46 Aβ1-26, Aβ1-30 и Aβ1-39 пептиды обнаруживаются в амилоидных бляшках.⁴⁰ Пептид Aβ1-43 peptide, расширенный за счет одиночного треонина на C-конце по сравнению с Aβ1-42, обнаруживает более сильную нейротоксичность и более высокую способность к агрегации, чем Aβ1-42⁴⁵³ и увеличивает степень агрегации протофибрилл и обнаруживает меделенные C-терминальные перемещения в мономерных и в связанных в протофибриллы формах Aβ1-43.⁴⁵⁴ Кроме того, многие посттрансляционные модификации Aβ пептидов также наблюдаются в амилоидных бляшках. Среди модификаций, протеолитическое удаление D1 и A2 и последующее замыкание в кольцо E3 и E11 в pyroglumate (Aβ3(pE) и Aβ11(pE)) особенно интересно.^47-49 Aβ(pE) являются наиболее цитотоксичным и агрегируют более быстро, чем обычный Aβ. Лишь 5% Aβ3(pE)-42, смешанного с 95% WT Aβ1-42, достаточно, чтобы существенно повысить цитотоксичность in vivo благодаря образованию гибридных Aβ3(pE)-42/Aβ1-42 олигомеров. Было предположено, что Aβ3(pE) может запускать AD за счет умножения посредством template-folding прион-подобного механизма с Aβ1-42. Этот укороченный вариант также известен, как действующий Tau-зависимым способом и особенно резистентен к деградации.⁵⁰ Наиболее интригующие и интересные мутации это несомненно защищающие от AD, но они не были изучены тщательно экспериментально и теоретически. Описаны две защитные мутации в позиции 2 у Aβ (в позиции 673 у APP). В Italian родословной, A2V, вызывает AD с ранним началом, если только наследуется от обоих родителей, тогда как гетерозиготные носители A2V не затрагиваются. A2V усиливает кинетику агрегации Aβ1-40 по фактору 4, но смесь Aβ1-40 WT и A2V пептидов защищает от AD.⁵⁴ Подтверждена нестабильность смешанных агрегатов.⁴⁵⁵ Мутация A2T, с др. стороны, всегда является защитной мутацией в гомозиготной и гетерозиготной форме. Эта мутация снижает продукцию Aβ на 40%, в отличие от A2V в её гомозиготном состоянии, при котором продукция Aβ усиливается.⁵⁴ Выявлено, что мутации, оказывая незначительный эффект на агрегацию пептида Aβ1-42, сильно модифицирует свойства пула Aβ1-40, при этом A2V ускоряет, а A2T задерживает агрегацию пептидов. Итак, физические свойства Aβ1-40/42 A2V/A2T и Aβ3(pE)-42 пептидов оставляют множество открытых вопросов и открывают новые перспекивы по разработке лекарств.

11. CONCLUSIONS Наши знания о стрктуре синтетических A β 1 - 40/1 - 42 фибрилл, протофибрил и крупных олигомеров заметно выросли в последние годы и стало ясно, что полиморфизм присутствует как в мономерах, так и фибрилах. Известно, что фибриллы с разными молекулярными структурами могут возникать в ответ на зависимую от окружающей среды само-сборку и кинетику скорее, чем на контроль термодинамики. Установлено также что метастабильные состояния могут возникать легче за счет использования соотв. затравок (seeds) или под действием сдирающего кровтока (shear flow), и структурные модели Aβ1 - 40 фибрилл, которые формируют разные образования в головном мозге пациентов с Alzheimer 's с разными симптомами AD. Эта высокая степень полиморфизма, которая возникает из-за многих физических факторов и персистирует в тканях головного мозга, коррелируя с разными фенотипическими отклонениями довольно плохая новость для разработки лекарств, поскольку одно лекарство может быть эффективным у одного пациента, но не у другого. Наши знания о структурной и динамической характеристике самых малых олигомеров, наиболее токсичных видов, и мономеров, премещающихся в очень ограниченном пространстве из-за их скоротечного характера и прирожденных нарушений, с помощью новых экспериментальных методов и методов эффективной сборки, с использованием множественных силовых полей и репрезентаций, наши знания об этих видах в водных растворах вблизи или на мембранах, с металлом или без, существенно увеличились, хотя полиморфизм агрегатов и высокая чувстительность к внешним условиям не облегчают воспроизводимость экспериментальных показателей и сходства моделей. Одним из преимуществ компьютерного моделирования является то, что подсчеты могут быть повторены с использованием разных условий pH и модельных мембран и могут быть исследованы эффекты сайт-специфических мутаций. Характеристика первичного ядра/ядер и популяции амилоид-компетентных мономерных состояний⁴⁷⁷ перед lag фазой остается затруднительным как экспериментально, так и теоретически из-за чувствительности к экспериментальным условиям и последовательности аминокислот. Одна аминокислотная замена достаточна, чтобы изменить ландшафт свободной энергии, как видно из её кинетики, а распределение вариантов размера олигомера FAD Aβ и недавние находки изотопного редактирования и ss-NMR, что Aβ 16-22 c E22Q характеризуется неожиданной антипараллельной ориентацией β-нитей, промежуточным состоянием, которое позднее переходит полностью в параллельные β-нити, подтверждает новый механизм зародышеобразования (nucleation) на пути прогрессивной сборки. Понимание взаимодействий Aβ 1-40/42, Aβ 1-40/42 A2V и A2T вариантов и Aβ3(pE)-42 пептидов как в мономерных, так и олигомерных формах, устанавливаемых с помощью ионов металлов и различных клеточных компонентов является главной задачей по выяснению молекулярных механизмов в начале AD. Как структура Aβ может быть связана с механизмом токсичности всё ещё неизвестно, посколько токсичностью обладают все олигомеры и фибриллы. Одним из источников токсичности является формирование мембранных каналов и конформация cylindrin, как полагают, является токсичной, но другие конформации антипараллельных β-sheet также рассматриваются как токсические. Кроме того, замены одиночных аминокислот способны или снижать (A2T, A2V) или увеличивать (FAD, K16A) токсичность. Другим источником токсичности являются ионы металлов и взаимодействия с клеточными партнерами, но наше понимание их всё ещё сильно ограничено. Несмотря на активные исследования лекарства за лекарством с целью воздействия на Aβ не удается замедлить течение AD при клинических испытаниях. Возможно, что воздействие на людей происходит слишком поздно, однако имеются и два других узких горлышка для улучшения лекарств. Во-первых, в то время как многие группы работают над разработкой лекарств, которые связывают Aβ фибриллы (следовательно, редуцируют процесс фрагментации) или соединяются с Aβ олигомерами, чтобы замедлить или ускорить образование фибрилл (fibrillation) и во всех случаях тем самым снизить цитотоксичность Aβ, но как каждое из них взаимодействует с Aβ 1-42 и Aβ3(pE)-42 олигомерами, неизвестно на уровне атомного разрешения, пока же получение с высоким разрешением структур комплексов Aβ олигомер/лекарство является необходимым условием для оптимизации кинетики и термодинамики свойств связывания подающих надежды соединений (и тем самым их специфичности), прежде проверки клеточной жизнеспособности, животных, моделирующих AD и клинических испытаний. Второе горлышко заключается в том, что повторная идентификация одного и того же типа молекул, подающих надежды, воздействующих на разные белки, только загрязняют химическую литерауру. Напр., quinones, являющиеся redox cyclers, metal complexers и ковалентными модификаторами. ⁴⁷⁹. Было установлено, что curcumin из куркума, EGCG из зеленого чая и resveratrol из винограда, которые снижают агрегацию Aβ in vitro, изменяют также свойства липидного бислоя и функцию разных мембранных белков. Следовательно, эффект одного из лекарств может быть не тем, который мы ожидаем, и в этом контексте мы недавно показали, используя экспрессируемые, а затем продуцируемые Aβ1-28, Aβ1-40 и Aβ1-42 пептиды со множественными подходами и разными индикаторами, что NQTrp ингибитор осуществляет свой подавляющий эффект посредством механизмов, иных, чем непосредственные взаимодействия с Aβ пептидами (O. Berthoumieu et al., unpublished results). Должны учитываться некоторые затруднения. Первым затруднением является то, что популяция димеров, тримеров и додекамеров (Aβ*56) варьирует в ткани головного мозга с возрастом, указывая тем самым, что подвергающиеся целенаправленному воздействию виды молекул при раннем и позднем начале не те же самые. Используя 75 индивидов с неизмененной познавательной способностью в пределах от детей до пожилых и 58 субъектов с легкими нарушениями познавательной способности, возможно с болезнью Алцгеймера, было установлено, что Aβ* 56 может играть патогенную роль очень рано в патогенезе AD.⁴⁸¹. Вторым затруднением является то, что эксперименты, описывают резкое ускорение образования фибрилл для Aβ1-40 пептидов при сдирающем кровотоке. ^482-484 Источник подобного кинетического ускорения всё ещё дебатируется. Кроме того, поскольку атомистическое моделирование в определенном растворителе полной агрегации Aβ1-40/42 пептидов, то грубое моделирование в подразумеваемом растворителе нуждается в воздействии гидродинамических эффектов. На Рис.17 мы описали предварительные результаты ранних ступеней агрегации 18 Aβ16-22 пептидов, блокируемых с помощью acetyl и amine в условиях сдирающего кровтока, используя CG модель OPEP с гидродинамическими взаимодействиями (S. Melchionna, P. Derreumaux, and F. Sterpone, unpublished results). Ради примера моделирование было осуществлено при довольно высокой концентрации (109 mM) и в отсутствие shear rates или в присутствии высоких shear rates (10⁸, 10⁹ и 10¹⁰ s^-1). При этом гидродинамические эффекты, ранние ступени агрегации уже были отличными от той Langevin динамики, наблюдаемой в зависимости от размера олигомеров. При высокой shear rates, мы наблюдали образование уникальных удлиненных агрегатов в течение 10 ns. В этой сильно концентрированной системе присутствие ламинарного сдирающего тока, по-видимому, не оказывалло эффекта на общю кинетику коллапса, но однако оказывало влияние на способ осуществляющейся агрегации. А именно, при увеличении скорости, возникает осцилляторное поведение в процессе агрегации. Наивысшая shear скорость также разрывала водородные мостики и контакты боковых цепочек в агрегатах; т.о., отсутствие монотоного поведения как функции гидродинамических пертурбаций ожидается для сходных процессов агрегации белков. Третьим вызовом стало прямое наблюдение самосборки Aβ белка в живых клетках как результата эффекта скученности. Используя записи во времени неинвазивной флюоресценции и сверхразрешающей флюоресценции, исследовали образование Aβ1-40 и Aβ1- 42 агрегатов в живых клетках. Оба пептида сохранялись в лизосомах, где их накопление приводило к агрегации, но кинетика агрегации Aβ 1-42 была существенно быстрее, чем у Aβ1-40 and, и в отличие от таковой у Aβ1-40, не обнаруживалось lag фазы. Компактные амилоидные агрегаты обнаруживались для обеих аллоформ. ⁴⁸⁶ Поскольку эти эксперименты представляют одну ступень, ведущую к пониманию агрегации в клетках, методы с более высоким пространственным разрешением и методы, выясняющие, как клеточное окружение влияет на динамику Aβ1-40/ 42 и их вариантов, являются основной проблемой. Кстати, в клетках NMR белка Aβ является идеальным инструментом для получения информации на атомном уровне, но препятствия остаются. Задачей является также определить влияние PrP и HSA на олигомеризацию Aβ. Мы недавно показали, что возможно определить динамику 18 000 HSA белков, охватывающих 80 миллионов частиц с помощью гидродинамических взаимодействий, согласующихся с экспериментальными трансляционными и ротационными константами диффузии как функции плотности системы. Наконец, патогененые события, участвуют в дисбалансе между продукцией и очисткой Aβ пептида. Важно понять в атомных деталях, как Aβ очищается с помощью γ-secretase и как на этот процесс влияют мутации A2V и A2T. Ясно, что недавнее установление 3D структуры человеческого γ-secretase комплекса 4 .5 A⁴⁹⁰ в комбинации с моделированием на Aβ1-55 димере может помочь разрешить этот вопрос. Поскольку многие ингибиторы разработаны к мишени, чтобы воздействовать на специфический регион Aβ, то было бы интересно изучить в клетках кумулятивные эффекты ингибиторов, предназначенные распознавать разные регионы Aβ. Было бы также интересно комбинировать разные лекарства, нацеленные на процессинг Aβ и на перевод Aβ агрегатов в более нестабильное состяние, более склонное к деградации.