Нарушения регуляции иммунитета, полиэндокринопатии, энтеропатии, Х-сцепленный (IPEX) синдром составляет прототип первичного нарушения регуляции иммунитета, вызываемый мутациями в гене forkhead box protein 3 (FOXP3), критическом транскрипционном факторе, необходимом для регуляторных Т клеток (Tregs). Пациенты обычно имеют тяжелые с ранним началом аутоиммунные проявления, которые являются фатальными в течение первого года жизни. Сегодня единственным лечением IPEX является аллогенные hematopoietic stem cell transplant (HSCT), но это сопряжено с риском осложнений и возможностью выживать до 15 лет в 73.2% (F. Barzaghi et al 2018). Более того, подходящий донор невсегда доступен. Как моногенное иммунное заболевание с ограниченным лечением, IPEX является идеальным кандидатом для генотерапии, когда гематопоэтические стволовые клетки пациента подвергаются генному редактированию и обратно вводятся в виде аутологичного трансплантата.

Авт. разработали CRISPR/Cas9 подход в комбинации с доставкой с помощью AAV донорской матрицы для восстановления экспрессии FOXP3 эндогенного локуса, что позволяет регулировать экспрессию дикого типа FOXP3, независимо от нижестоящих мутаций. Мы оказались способны редактировать CD4+ эффекторные T клетки (Teff) и Tregs, продемонстрировав, что они поддерживают характерные фенотипические маркеры и являются функциональными in vitro. От IPEX пациентов Tregs, отредактированные с помощью конструкции, обнаруживают частичное восстановление экспрессии FOXP3 и функциональную супрессию после совместного культивирования с соотв. (responder) T клетками. После редактирования гена hematopoietic stem and progenitor Cells (HSPCs) из кровеносных сосудов клетки способны к долговременному внедрению в гуманизированных мышей и дифференцируются во множественные гематопоэтичекие субнаборы (CD13, CD19, CD56, CD3) и частично возрождают Tregs (CD4+CD25+FOXP3+).